四季茶花夏咏国色叶片愈伤诱导与植株再生研究

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20220381

摘要/Abstract

摘要：

以四季茶花夏咏国色当年生叶片为外植体,通过愈伤组织分化不定芽获得再生植株,为大规模无性繁殖和遗传转化提供技术支持。结果表明,外植体较适宜的消毒方法为:75% C₂H₅OH处理30 s后,0.1% HgCl₂处理5 min或2% NaClO处理8 min,成活率分别为71.85%和72.59%;培养基中添加0.02%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)能有效阻止外植体褐化现象发生;以基本培养基(MS)为基础培养基,添加2.0 mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)+4.0 mg·L^-1 6-苄基腺嘌呤(6-BA)+0.02% PVP+50 mL·L^-1椰汁(CW)诱导叶片愈伤组织,诱导率达90.37%;在添加0.5 mg·L^-1 2, 4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA+50 mL·L^-1 CW的继代培养基上经过3次转接继代培养后,将愈伤组织转入MS+0.5 mg·L^-1萘乙酸(NAA)+10.0 mg·L^-1 6-BA+100 mL·L^-1 CW+100 mg·L^-1谷氨酰胺(Gln)+100 mg·L^-1脯氨酸(Pro)的分化培养基中,约60 d后可获得再生不定芽,叶片愈伤分化率约37.78%;利用500 mg·L^-1吲哚丁酸(IBA)浸泡不定芽基部,70 min后转接至1/2 MS固体培养基中,生根率达34.44%。初步建立了夏咏国色愈伤组织诱导及植株再生体系。

关键词: 四季茶花, 夏咏国色, 愈伤组织, 不定芽分化, 生根, 植株再生

中图分类号:

S685.14

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图/表 9

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处理	75% C₂H₅OH/s	0.1% HgCl₂/min	2% NaClO/min	污染率/%	死亡率/%	成活率/%
1	20	3	0	77.84±5.44 a	14.07±2.77 e	5.93±3.78 g
2	20	5	0	65.93±2.77 b	15.56±1.81 e	18.52±4.19 f
3	20	8	0	38.52±3.78 c	25.93±2.77 c	35.56±3.63 d
4	30	3	0	21.48±1.05 d	17.78±1.81 de	60.74±2.10 b
5	30	5	0	11.85±1.05 fg	16.30±2.77 de	71.85±3.78 a
6	30	8	0	18.52±2.77 de	36.30±2.77 b	45.19±1.05 c
7	45	3	0	42.22±1.81 c	22.22±3.63 cd	35.56±3.14 d
8	45	5	0	14.07±1.05 ef	28.15±3.78 c	57.78±3.14 b
9	45	8	0	6.67±1.81 g	65.19±2.77 a	28.15±2.77 e
10	20	0	3	81.48±3.78 a	16.30±3.78 d	2.96±2.77 f
11	20	0	5	67.41±2.77 b	14.07±2.77 d	18.52±2.77 e
12	20	0	8	34.07±6.37 d	17.78±1.81 cd	52.59±2.10 b
13	30	0	3	29.63±3.78 d	17.78±1.81 cd	52.59±5.54 b
14	30	0	5	26.67±3.63 de	13.33±1.81 d	60.00±3.14 b
15	30	0	8	12.59±2.77 f	14.81±2.77 d	72.59±5.54 a
16	45	0	3	42.22±3.63 c	22.96±2.77 c	34.81±2.77 d
17	45	0	5	20.74±2.77 e	34.81±3.78 b	44.44±3.63 c
18	45	0	8	7.41±2.77 f	58.52±2.77 a	34.07±2.77 d

处理	75% C₂H₅OH/s	0.1% HgCl₂/min	2% NaClO/min	污染率/%	死亡率/%	成活率/%
1	20	3	0	77.84±5.44 a	14.07±2.77 e	5.93±3.78 g
2	20	5	0	65.93±2.77 b	15.56±1.81 e	18.52±4.19 f
3	20	8	0	38.52±3.78 c	25.93±2.77 c	35.56±3.63 d
4	30	3	0	21.48±1.05 d	17.78±1.81 de	60.74±2.10 b
5	30	5	0	11.85±1.05 fg	16.30±2.77 de	71.85±3.78 a
6	30	8	0	18.52±2.77 de	36.30±2.77 b	45.19±1.05 c
7	45	3	0	42.22±1.81 c	22.22±3.63 cd	35.56±3.14 d
8	45	5	0	14.07±1.05 ef	28.15±3.78 c	57.78±3.14 b
9	45	8	0	6.67±1.81 g	65.19±2.77 a	28.15±2.77 e
10	20	0	3	81.48±3.78 a	16.30±3.78 d	2.96±2.77 f
11	20	0	5	67.41±2.77 b	14.07±2.77 d	18.52±2.77 e
12	20	0	8	34.07±6.37 d	17.78±1.81 cd	52.59±2.10 b
13	30	0	3	29.63±3.78 d	17.78±1.81 cd	52.59±5.54 b
14	30	0	5	26.67±3.63 de	13.33±1.81 d	60.00±3.14 b
15	30	0	8	12.59±2.77 f	14.81±2.77 d	72.59±5.54 a
16	45	0	3	42.22±3.63 c	22.96±2.77 c	34.81±2.77 d
17	45	0	5	20.74±2.77 e	34.81±3.78 b	44.44±3.63 c
18	45	0	8	7.41±2.77 f	58.52±2.77 a	34.07±2.77 d

处理	外植体类型	PVP/%	褐化率/%
1	小叶片横切	0	55.56±5.44 b
2	大叶片剪叶盘	0	70.37±2.77 a
3	小叶片横切	0.02	22.96±3.78 de
4	大叶片剪叶盘	0.02	29.63±2.77 d

处理	外植体类型	PVP/%	褐化率/%
1	小叶片横切	0	55.56±5.44 b
2	大叶片剪叶盘	0	70.37±2.77 a
3	小叶片横切	0.02	22.96±3.78 de
4	大叶片剪叶盘	0.02	29.63±2.77 d

处理	2,4-D/ (mg·L^-1)	6-BA/ (mg·L^-1)	诱导率/ %	生长状态	最早出现时间/ d
1	0.5	1.0	14.07±2.77 e	生长慢,长势差,颗粒小	25
2	0.5	2.0	31.85±3.78 d	生长慢,长势慢,颗粒小	20
3	0.5	4.0	50.37±3.78 c	生长缓慢,长势一般,颗粒硬	18
4	1.0	1.0	34.81±2.77 b	生长慢,长势慢,颗粒小	20
5	1.0	2.0	49.63±4.57 c	生长缓慢,长势一般,颗粒硬	18
6	1.0	4.0	67.41±2.77 b	生长较快,长势良好,深绿色,颗粒紧实	16
7	2.0	1.0	65.93±4.57 b	生长较快,长势良好,深绿色,颗粒紧实	16
8	2.0	2.0	72.59±3.78 b	生长较快,长势良好,深绿色,颗粒紧实	16
9	2.0	4.0	90.37±2.77 a	生长快,淡黄至浅绿色,颗粒蓬松	14