一株产蛋白酶海洋细菌的分离鉴定及发酵条件研究

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20201258

浙江农业科学 ›› 2020, Vol. 61 ›› Issue (12): 2629-2633.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20201258

一株产蛋白酶海洋细菌的分离鉴定及发酵条件研究

金楚杰, 吴津, 郭伟鑫, 劳吴荣, 杨鸿, 李鹏()

浙江海洋大学海洋科学与技术学院,浙江舟山 316022

收稿日期:2020-10-12 出版日期:2020-12-11 发布日期:2020-12-11
通讯作者: 李鹏
作者简介:李鹏(1980—),男,浙江舟山人,讲师,硕士,从事海洋微生物学研究工作,E-mail: lpqp3818081@163.com。
金楚杰(1997—),男,浙江金华人,从事生物科学研究工作,E-mail: 43677860@qq.com。
基金资助:
国家级大学生创新创业训练项目(201810340039X);国家重点研发项目“蓝色粮仓科技创新”重点专项(2019YFD0901305);舟山市科技局项目(2019C21011,2016C41001);2019年福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室开放课题基金(2019fjscq04)

Received:2020-10-12 Online:2020-12-11 Published:2020-12-11

摘要/Abstract

摘要：

从舟山海产品加工厂收集废弃鱼虾蟹等下脚料,利用脱脂奶平板培养基进行产蛋白酶菌株的分离筛选,获得的菌株利用Folin-酚法进行酶活测定,将酶活性最高的菌株进行16S rDNA分子鉴定,绘制系统进化树。研究初始pH、盐度、培养温度、培养时间等单因素对蛋白酶活性的影响,再利用Expert-Design软件中的响应面分析方法(RSA)对该菌株的发酵条件进行系统优化。结果表明,分离筛选得到1株具有较高蛋白酶活性的海洋细菌SP1,酶活测试结果显示该海洋细菌SP1的初始酶活为88.6 U·mL ^-1,16S rDNA分子鉴定结果显示该菌株属于蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus。菌株Bacills cereus SP1的单因素培养结果显示,该菌株培养时间48 h、初始pH值8.5、NaCl浓度25 g·L ^-1、培养温度40 ℃对应的酶活最高。通过Expert-Design软件,利用Box-Behnken Design(BBD)方法进行响应面分析,优化设计培养条件,BBD响应面分析结果显示,培养温度35.7 ℃、初始pH 7.7、NaCl浓度为20.7 g·L ^-1、培养时间48 h,摇床转速120 r·min ^-1,5%的接种量,实际酶活为101.8 U·mL ^-1,比优化前的酶活提高了14.9%,预测精度达到95.8%。

关键词: 碱性蛋白酶, 分离鉴定, 蜡样芽胞杆菌, 发酵

中图分类号:

Q936

金楚杰, 吴津, 郭伟鑫, 劳吴荣, 杨鸿, 李鹏. 一株产蛋白酶海洋细菌的分离鉴定及发酵条件研究[J]. 浙江农业科学, 2020, 61(12): 2629-2633.

图/表 6

参考文献 20

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实验	温度/ ℃	pH	NaCl/ (g·L^-1)	酶活/ (U·mL^-1)
1	25.0	7	25	86.3
2	50.0	7	25	59.2
3	25.0	9	25	62.8
4	50.0	9	25	53.5
5	25.0	8	5	89.2
6	50.0	8	5	67.4
7	25.0	8	45	61.5
8	50.0	8	45	59.6
9	37.5	7	5	88.9
10	37.5	9	5	84.2
11	37.5	7	45	81.0
12	37.5	9	45	58.9
13	37.5	8	25	89.9
14	37.5	8	25	90.6
15	37.5	8	25	91.2
16	37.5	8	25	92.8
17	37.5	8	25	97.5

实验	温度/ ℃	pH	NaCl/ (g·L^-1)	酶活/ (U·mL^-1)
1	25.0	7	25	86.3
2	50.0	7	25	59.2
3	25.0	9	25	62.8
4	50.0	9	25	53.5
5	25.0	8	5	89.2
6	50.0	8	5	67.4
7	25.0	8	45	61.5
8	50.0	8	45	59.6
9	37.5	7	5	88.9
10	37.5	9	5	84.2
11	37.5	7	45	81.0
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14	37.5	8	25	90.6
15	37.5	8	25	91.2
16	37.5	8	25	92.8
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