以青海互助种猪场的八眉猪为试验动物。取仔猪耳组织5~6块, 置于盛有75%乙醇的EP管中, 放入冰盒中带回实验室, 在-20 ℃冻存备用。

基因组DNA提取试剂盒、蛋白酶K、Tris平衡酚、氯仿-异戊醇、NaAc、冰无水乙醇、75%乙醇、1× TE缓冲液。

自动平衡离心机Labofuge 200和高速冷冻离心机D-37520(德国Eppendorf公司), 低温冰箱MDF-U541(日本SANYO电子有限公司), 微量移液器(德国Eppendorf公司), 普通PCR仪T1(德国Biometra公司), 凝胶数字成像系统BiO-BEST 140E(美国西蒙公司)等。

试剂盒法。依据TIANamp Genomic DNA Kit(离心柱型)说明书进行操作。

酚-氯仿抽提法。根据《分子克隆实验指南》中DNA提取方法进行操作^[1]。取约30 mg的猪耳组织样品, 放入1.5 mL离心管中, 用手术剪刀剪碎(尽量剪的细小, 便于消化)。加入600 μ L DNA提取液, 上下翻转混匀。加入10 μ L蛋白酶K, 封口后置于55 ℃水浴中震荡12 h 或更长, 直至组织完全消化。待耳组织全部被消化后将样品从水浴锅中取出, 冷却至室温后加入600 μ L Tris平衡酚, 缓慢颠倒摇晃10 min, 4 ℃ 12 000 r· min^-1离心10 min。吸取上清液, 加入600 μ L Tris平衡酚, 缓慢颠倒摇晃10 min, 4 ℃ 1 2 000 r· min^-1离心10 min。吸取上清液, 加入300 μ L Tris平衡酚和300 μ L氯仿-异戊醇, 缓慢颠倒摇晃10 min, 4 ℃ 12 000 r· min^-1离心10 min。吸取上清液, 加600 μ L氯仿-异戊醇, 缓慢颠倒摇晃10 min, 4 ℃ 12 000 r· min^-1离心10 min。 吸取上清液, 加入60 μ L NaAc和在-20 ℃充分预冷的冰无水乙醇1 000 μ L, 轻微摇晃后即可出现乳白色丝状DNA絮状沉淀, 然后将样品置于冰中15 min后取出, 4 ℃ 12 000 r· min^-1 离心10 min。 弃去上清液, 加75%乙醇1 000 μ L, 12 000 r· min^-1离心2 min, 重复操作1次。然后将离心管置于室温下自然干燥。待乙醇完全挥发后, 加入30 μ L 1× TE缓冲液(参考文献[1]为加200 μ L 1× TE), 4 ℃放置24 h以溶解DNA, 后置于-20 ℃保存备用。