供试材料为浙江省丽水市莲都区太平乡枇杷园里的本地特有枇杷。品种为太平白(白肉), 采集时间为2015年11月5日的花序、花朵、花蕾、花瓣。色谱标准品为SIGMA公司生产的槲皮素(批号:117-39-5)、槲皮苷(批号:522-12-3)、苦杏仁苷(批号:29883-15-6), 其他试剂为分析纯级。

1.2.1 枇杷花功能成分供试液的制备

枇杷花50 ℃烘干, 冷藏备用。枇杷花粉碎, 过筛, 精确称取枇杷花样品1 g, 按1∶ 30的固液比用95%乙醇浸泡30 min后超声提取。提取条件:时间30 min, 温度75 ℃, 超声频率40 KHz。提取液过滤、浓缩、定容备用, 每个样品做3个平行; 测定前样品经0.45 μ m微孔滤膜过滤。

1.2.2 槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量测定

取1.2.1制备的溶液采用Agilent1200series高效液相色谱仪, 按照各自的色谱条件进行测定, 根据峰面积计算样品中槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷的含量, 重复3次。

槲皮素色谱条件。色谱柱Agilent Eclipse plus C₁₈(4.6 m× 150 mm, 5 μ m); 流动相MeOH∶ 0.4% H₃PO₄ 50∶ 50, 检测波长360 nm; 流速1 mL· min^-1; 柱温25 ℃; 进样量10 μ L; 积分方法为归一化法。

槲皮苷色谱条件。色谱柱Agilent Eclipse plus C₁₈(4.6 m× 250 mm, 5 μ m); 流动相Acetonitrile:0.02 mol· L^-1KH₂PO₄(adjust pH 2.5 with H₃PO₄)18∶ 82, 检测波长350 nm; 流速1 mL· min^-1; 柱温30 ℃; 进样量10 μ L; 积分方法为归一化法。

苦杏仁苷色谱条件。色谱柱Agilent Eclipse plus C₁₈(4.6 m× 150 mm, 5 μ m); 流动相ACN:0.1%H₃PO₄ 12∶ 88, 检测波长210 nm; 流速1 mL· min^-1; 柱温25 ℃; 进样量10 μ L; 积分方法为归一化法。

1.2.3 枇杷花的干燥方法

烘箱干燥。将枇杷花分别在50 ℃、100 ℃和150 ℃的烘箱中烘干至恒重。

室温干燥。将枇杷花放置室内通风处自然风干。

微波干燥。将枇杷花分别用高火、中火、低火微波杀青5 min, 再烘箱50 ℃干燥至恒重。

以微波高火, 分别对供试品杀青5、7、11 min, 再烘箱50 ℃干燥至恒重。

由表1可知, 枇杷花中生物活性物质的含量随发育阶段不同而发生波动。太平白枇杷花不同发育阶段的花朵其槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷的含量存在显著差异。晚花期的花朵所含的槲皮素和槲皮苷最高, 分别为0.34± 0.17和0.82± 0.14 mg· g^-1, 而苦杏仁苷含量最低, 为0.66± 0.09 mg· g^-1, 盛花期的花朵苦杏仁苷含量最高, 为2.03± 0.17 mg· g^-1, 而初花期的枇杷花的槲皮素和槲皮苷的含量最低, 分别为0.16± 0.06和0.43± 0.16 mg· g^-1。随着枇杷花发育的不同阶段, 里面槲皮素和槲皮苷的含量变化曲线是一直增加, 而苦杏仁苷含量是先增加再降低。从枇杷花的生物活性物质含量及生物总量的角度考虑, 采收时间应确定为盛花期。

表1

表1

表1 不同花期枇杷花槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量 花期 含量/(mg· g-1) 槲皮素 槲皮苷 苦杏仁苷 初花期 0.16± 0.06 0.43± 0.16 1.14± 0.31 盛花期 0.23± 0.15 0.59± 0.25 2.03± 0.17 晚花期 0.34± 0.17 0.82± 0.14 0.66± 0.09

表1 不同花期枇杷花槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量

表2统计分析表明, 太平白枇杷花用不同干燥方法测的生物活性物质存在显著性差异。对于烘箱干燥, 50 ℃干燥的条件下, 枇杷花中的槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量较高, 含量分别为0.28、0.63、1.92 mg· g^-1, 随着烘箱干燥温度的升高, 生物活性物质含量逐渐下降, 说明测定的3种物质不耐高温; 对于微波干燥来说, 从测定含量上看高火和中火处理无显著差别, 但中火含量略高于高火, 且高火容易将花瓣烧焦变形, 降低枇杷花商品性; 室温干燥, 生物活性物质含量最低, 可能是枇杷花中自带的酶和空气中的氧气把槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷分解和氧化。

表2

表2

表2 干燥方式对槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量的影响 干燥方式 含量/(mg· g-1) 槲皮素 槲皮苷 苦杏仁苷 烘箱50 ℃ 0.28± 0.14 0.63± 0.16 1.92± 0.33 烘箱100 ℃ 0.15± 0.09 0.35± 0.12 1.14± 0.32 烘箱150 ℃ 0.08± 0.05 0.19± 0.07 0.51± 0.21 微波高火 0.22± 0.11 0.49± 0.14 1.97± 0.12 微波中火 0.24± 0.07 0.53± 0.25 2.23± 0.19 微波低火 0.17± 0.09 0.41± 0.11 1.59± 0.24 室温干燥 0.16± 0.05 0.38± 0.14 0.94± 0.31

表2 干燥方式对槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量的影响

由表3统计分析表明, 不同微波杀青时间, 样品间的生物活性物质的含量存在显著性差异。杀青时间为5 min时, 枇杷花中的槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量最高, 含量分别为0.25± 0.11、0.74± 0.14、2.12± 0.56 mg· kg^-1, 且此时花瓣完整, 无变色。随着杀青时间的延长, 枇杷花开始变形变色, 其生物活性物质含量降低, 其中槲皮素的含量的降幅最大, 苦杏仁苷降幅最小。

表3

表3

表3 微波杀青时间槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷 含量的影响 杀青时间/ min 含量/(mg· g-1) 槲皮素 槲皮苷 苦杏仁苷 5 0.25± 0.11 0.74± 0.14 2.12± 0.56 7 0.17± 0.08 0.43± 0.07 1.73± 0.34 11 0.11± 0.06 0.35± 0.11 1.45± 0.21

表3 微波杀青时间槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷 含量的影响

表4表明, 烘箱50 ℃干燥至恒重与微波中火5 min+烘箱50 ℃至恒重的工艺, 结果基本一样, 但经过微波中火5 min的杀青过程, 泡出的花茶更有清香风味; 微波中火30 min+烘箱50 ℃至恒重工艺, 由于微波杀青过程中供试品的温度过高致使枇杷花的花形、花色及香味欠佳。

表4

表4

表4 不同干燥方式对枇杷花商品属性的影响 干燥方式 花形 花色 汤色 滋味 烘箱50 ℃至恒重 完整, 花瓣厚实, 花朵大小均匀 土黄色、色泽均匀 澄清, 浅黄鲜亮 较清香, 甘醇微甜 微波中火30 min+烘箱50 ℃至恒重 花朵大小欠均匀 棕黄色 较澄清, 浅黄 香气浓, 较甘醇 微波中火5 min+烘箱50 ℃至恒重 完整, 花瓣厚实, 花朵大小均匀 土黄色、色泽均匀 澄清, 浅黄鲜亮 清香, 甘醇微甜

表4 不同干燥方式对枇杷花商品属性的影响

采收时间和初加工方法是花类中药材GAP实践的关键问题之一, 直接影响到药材的产量、品质以及深度开发, 因此需摸索枇杷花不同花期及加工方法对槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷含量的影响。根据试验结果可知, 综合花量、花期与有效成分含量的平衡, 生产工艺的操作便捷性和规划生产的可行性来看, 以丽水太平白枇杷花盛花期, 微波杀青5 min+烘箱50 ℃干燥至恒重为宜。在实际生产实践中, 因人工成本较高, 为减少劳动力, 在疏花采收过程中同时采收花蕾和盛花花朵作为制作枇杷花茶的原材料, 并确定了以下2条生产工艺, 以减少加工对有效成分与商品性的影响。

枇杷花茶(花蕾):枇杷花→ 净制→ 微波杀青5 min→ 烘箱50 ℃干燥→ 称重→ 包装。

枇杷花茶(花瓣):枇杷花序→ 净制→ 取花瓣→ 微波杀青5 min→ 烘箱50 ℃干燥→ 称重→ 包装。

现代都市由于大气污染日益严重, 空气中存在大量的灰霾, 给人体的健康造成巨大的影响, 开发枇杷花可满足社会的保肺护肺的养生需求。太平白枇杷品种成花易, 花序产量高。以2014— 2015年的8年生成龄枇杷园观察, 根据高效生产要求, 疏除1/3总枝量的花序, 每667 m²枇杷鲜花序产量为40~70 kg, 收购价为40元· kg^-1, 花蕾/花朵的干鲜比为1∶ 5, 由此推算, 每667 m²枇杷花序产值为1 600~2 800元。对果农而言, 销售原本疏除丢弃的枇杷花序, 只经过简单加工, 即可增加2 000多元的收入。

已有研究对枇杷花的主要药效物质不明确。本研究选取槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷为研究切入点, 从推广生产的便捷性与实用性角度来开发枇杷花研制工艺, 此加工工艺对于其他生物营养活性物质含量的影响及不同保存条件对枇杷花茶品质的影响还需要进一步研究。