三叶青对生长环境要求严格, 常生长在阴湿的山坡、山沟、谷溪中, 喜欢时隐时现的散光照射、湿润的气候。对土壤要求不严格, pH值5.0~7.0 的酸性至中性土壤均可生长。怕炎夏高温, 通常气温在25 ℃时生长良好, 平均气温低于5~10 ℃时停止生长, 忌强光暴晒, 忌干旱。有极强的地域选择性, 水平分布为18° 30'~32° 20'N, 垂直分布海拔为300~1 300 m, 在我国福建、浙江、江西、广西、广东、海南、台湾、云南、湖南等地均有发现, 其中以广西三叶青和浙江三叶青种类最多^[3]。

三叶青为多年生草质攀缘藤本, 藤茎细软, 卷须与叶对生, 卷须以直行捆绑式使藤攀爬于其他植物上, 较老藤形扁、表皮紫褐色, 较嫩藤形圆、表皮青色, 叶互生, 一柄长三叶, 中叶稍大, 叶呈卵状披针形, 边缘有锯齿, 叶柄及叶片表面翠绿。每年5月开花, 至秋季末结果, 浆果球状, 黄豆般大小, 成熟后色泽鲜红艳丽, 挂果期长达数月。块根形状主要有纺锤形、卵圆形、葫芦形或椭圆形, 单个或数个相连呈串珠状^[4]。

朱波等^[5]利用ISSR分子标记技术对从浙江、江西、福建、广西、湖南、湖北等三叶青主分布区收集的24份种质资源进行分析, 用UPGMA法将其分成4大类, 其中浙江种源为一组, 江西、广西、湖北、湖南为一组, 湖南怀化与广西钟山为一组, 贵州种质单独一组。表明ISSR分子标记适用于三叶青种质资源遗传多样性与亲缘关系分析。从地理位置和相似系数分析, 种质资源间亲缘关系的远近不全由地理距离决定, 生态气候、地形地貌、海拔、经纬度等自然因素及人类活动等社会因素均会影响亲缘关系。符渊淼^[6]将DNA条码技术应用于三叶青及其近缘种的种质鉴定, 确定了ITS及rbcL+matK+ITS是鉴定三叶青和其他近缘种的最佳条码。分子生物学技术在三叶青种质鉴别中的应用研究尚不成熟, 今后应加强种质资源收集, 并且加快建立适合三叶青种质资源鉴别且使用可行的技术, 以保护三叶青这一珍贵的药用资源。

黄真等^[7]对广西三叶青和浙江三叶青块根性状进行鉴别, 结果显示广西三叶青个体较大, 多数表面有皱纹, 断面粉红色; 而浙江三叶青个体较小, 较圆整, 光滑, 断面类白色。另外显微鉴定显示, 两者药材性质也不相同, 两者浸出液中都含有黄酮类化合物、多糖和氨基酸, 但对具体成分及药效差别尚未研究。郑军献等^[8]用紫外可见分光光度法测定广西和浙江的共10个样本, 结果表明, 浙江产三叶青的总黄酮含量高于广西产, 浙江产中又以建德种源最高, 常山次之, 天台第三, 兰溪最低。范世明等^[9]对采自福建福安、顺昌、泰宁、福鼎、柘荣等地的三叶青进行总黄酮含量测定, 结果不同产地的三叶青块根总黄酮含量存在明显差异, 其中福安和泰宁的三叶青总黄酮含量较高, 且野生比人工栽培的总黄酮含量更高。杨雄志等^[10]对分别在浙江乐清、舟山二地区和江西、福建、湖北、广西等地采集的6个三叶青种源提取物进行研究发现, 浙江乐清和舟山的三叶青提取物在解热和对5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺含量影响方面都占有明显优势, 这与郑军献等^[8]的测定结果基本一致。付金娥等^[11]对浙江三叶青和广西三叶青12种元素进行测定, 发现除Zn、Cr、Pb外, 其他9种元素浙江三叶青均高于广西三叶青。目前, 对不同种源三叶青有效成分含量并没有系统的比较研究, 从已有的研究可以看出, 浙江种源三叶青从品质、药效上都属于比较好的。浙江省三叶青又可分很多不同种源, 它们之间的优劣比较还有待进一步的研究探讨。

浦锦宝等^[12]采用500 mg· L^-1生根粉溶液浸泡插穗切口1 h, 然后与地面成35° ~45° 斜插于砂壤土中, 实现了三叶青的人工扦插繁殖。吉庆勇等^[13]对三叶青扦插繁殖技术进行研究, 结果用1 000 mg· L^-1IBA浸渍2~3年生三叶青老枝插条10 s后扦插于黄土中的繁殖效果较好。利用扦插手段进行三叶青繁殖操作比较简单, 目前, 浙江省多地都通过这种方法来进行种苗繁育, 多方比较显示, 扦插于装有基质的容器中的效果要好于直接扦插在土中的对照, 但这种方法不适用于大批量的种苗繁育。

钟毓倩^[14]对三叶青不同部位(茎尖、带腋芽的茎段和叶片)的外植体进行诱导, 在相同的灭菌处理下和同种培养基中, 茎尖为最佳诱导外植体, 同时认为MS+NAA 0.2 mg· L^-1是最佳的增殖培养基。钱丽华等^{[15, 16]}均采用三叶青茎段腋芽为外植体实现了快速繁殖。邵骏骅等^[17]以三叶青带幼嫩腋芽茎段为外植体, 成功建立了三叶青高效快繁技术体系, 判定最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg· L^-1+NAA 0.1 mg· L^-1, 最佳生根培养基为MS+IBA 0.5 mg· L^-1。吴浩等^[18]以不带腋芽的茎段为外植体诱导愈伤组织, 通过诱导组织脱分化形成不定芽, 实现了三叶青人工繁殖, MS、B5培养基交替继代方式有利于三叶青愈伤组织的继代和分化。上述研究说明, 三叶青组培快繁技术已趋向成熟, 规模化工厂化育苗已基本可以实现。

毛丽花^[19]在果园和蔬菜棚架下, 采用袋式栽培和直接种植的方式进行三叶青栽培, 发现袋式种植比大田和直接种植在地里的三叶青块根更多, 经济效益更明显。结合浙江省各地三叶青林下栽培情况, 认为郁闭度为0.6以上, 已采取垦复、抚育等较高强度经营管理措施的(半)常绿阔叶林、油茶林、香榧林等成龄林下, 且土层厚度> 30 cm, 含腐殖质丰富的偏酸性土壤, 坡度< 30° 排涝较好的山坡地较适合种植三叶青。

为防止水土流失, 保护生态环境, 提高产量, 推荐以控根容器栽培为最佳。为了防止杂草, 摆放控根容器区域林地实行带垦或劈草后铺设地膜。基质配方为33%林地腐殖质土或泥炭、16%红壤, 26%蛭石、8%珍珠岩、17%砻糠, 堆沤发热后才能使用。种植时间为每年的冬季和春季, 要求随起苗随栽, 避免苗根遭受风吹和日晒。

本课题组近几年来对三叶青栽培技术进行研究, 总结出一套包括选地、定植、田间管理、采收等在内的规范化栽培技术。

选择土质疏松、肥沃、略呈酸性及排水良好的阴面山坡地, 除草整地。选用苗高15~20 cm, 带有5~10条根的健壮种苗进行定植。定植应选在春季3月左右, 此时日平均气温在10 ℃以上, 地表温度上升, 无冻土, 可有效防止低温对种苗的伤害。定植时按株行距0.1 m× 0.3 m种植, 用手压实并浇足定根水, 使根系与土壤紧密结合。

期间应注意田间管理工作, 及时中耕除草, 为种苗创造一个疏松、通风的良好环境, 并视土壤肥力情况适当施肥。在进行田间管理时, 应注意避免伤及种苗根系, 适时培土防止根系外露影响产量。三叶青病虫害主要有叶斑病, 可用65%代森锌可湿性粉剂500~600倍液或1∶ 1∶ 150的波尔多液进行防治。在仿野生栽培三叶青过程中遮荫是关键, 应及时设置遮阳网, 遮阳网遮蔽程度为70%左右。

三叶青地上及地下部分的生长主要集中在一年中的4— 7月和9— 11月, 其他季节处于生长缓慢或休眠状态。而10月中旬至11月下旬三叶青进入秋发期, 此阶段主要以地下块茎的生长为主, 基本占到全年生长量的80%。一般栽培3~4年即可收获, 采收一般在冬至前后, 挖取根块, 除去泥土, 洗净, 切片鲜用或晒干。藤条可回收用作育苗插穗。

三叶青块根高产的关键:一是在做好田间管理的同时, 控制好光照度和掌握好采收时间; 二是合理施用肥料, 调节土壤湿度。