引用本文
肖珊美, 杨晓东, 刁银军, 周玮琳. 基于紫外烘晒的陈皮化柑橘总黄酮含量测定[J]. 浙江农业科学, 2020,61(5):1009-1010
[J]. ZHEJIANG NONGYE KEXUE,2020,61(5): 1009-1010  
doi: 10.16178/j.issn.0528-9017.20200564
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基于紫外烘晒的陈皮化柑橘总黄酮含量测定
肖珊美, 杨晓东, 刁银军, 周玮琳
金华职业技术学院,浙江 金华 321017

作者简介:肖珊美(1965—),女,教授,主要从事分析化学教学研究与应用工作,E-mail:xsm65@163.com。

基金项目: 2015科技部国家星火计划(2015GA700072); 衢州市科技计划(2018K11)
摘要

采用硝酸铝显色法处理芦丁标准溶液和陈皮化柑橘样品溶液,使用紫外可见分光光度法测定紫外烘晒制备的陈皮化柑橘总黄酮的含量,检测波长为510 nm。测得紫外烘晒制备的陈皮化柑橘总黄酮平均含量为61.05 mg·g-1,该检测方法回收率为98.1%,精密度为0.4%,稳定性为1.6%。检测结果表明,紫外烘晒的陈皮化柑橘中含有丰富的黄酮类化合物,具有进一步开发应用的价值。

关键词: 紫外烘晒; 陈皮化柑橘; 总黄酮; 紫外分光光度法
中图分类号:X792;S666 文献标志码:B 文章编号:0528-9017(2020)05-1009-02

陈皮为中医临床常用理气药, 来源于芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮[1, 2]。柑橘是世界第一大果树品种, 种植面积和产量在世界百果中均居首位[3]。浙江省是我国柑橘主产地之一[4], 温州蜜橘与茶枝柑、大红袍、福橘并列, 被2015年版《中国药典》收录为4种制作陈皮的柑橘原材料之一[5]。柑橘具有润肺、止咳、化痰、健脾、顺气、止渴的药效[6]。柑橘富含黄酮类化合物, 不同品种的种类和分布有所不同[7, 8]。本研究将温州蜜橘全果在短波紫外线照射下, 后经45~55 ℃低温缓慢干燥, 促使表皮陈皮化, 制作成“ 全果陈皮化柑橘” , 并测定其中总黄酮的含量, 旨在为柑橘的开发利用提供参考。

1 材料与方法
1.1 仪器与设备

UV1900双光束紫外可见分光光度计(上海佑科仪器仪表有限公司), 全天候紫外烘晒干燥箱(自制), JY-YF-1000摇摆式高速中药材粉碎机(浙江省瑞安市东源医疗设备机械厂), FA114A电子分析天平(上海豪晟科学仪器有限公司), LT502C电子秤(常熟市天量仪器有限责任公司), KQ-500TSE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 主要材料

温州蜜橘采自衢州市柯城区草香园农产品专业合作社柑橘种植基地, 经自制的全天候紫外烘晒干燥箱烘干, 再用摇摆式高速中药材粉碎机粉碎。芦丁对照品购自中国药品生物制品鉴定所, 甲醇为色谱纯, 其他试剂均为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 对照品制备

称取芦丁标准品0.015 9 g, 用甲醇溶解, 定容于50 mL容量瓶中, 制备浓度为0.318 mg· mL-1的芦丁对照品溶液。

1.3.2 样品制备

称取陈皮化柑橘粉末0.801 5 g, 加入甲醇60 mL, 超声提取60 min后过滤, 用适量甲醇清洗残渣并过滤, 收集滤液, 用甲醇定容至100 mL。

1.3.3 硝酸铝显色法

吸取适量芦丁对照品及样品提取液于10 mL容量瓶中, 加3 mL二次蒸馏水和5%亚硝酸钠溶液0.5 mL, 混匀后放置5 min, 加10%硝酸铝溶液0.5 mL, 混匀后放置5 min, 加5%氢氧化钠2.5 mL, 混匀放置10 min后用二次蒸馏水定容至10 mL。

1.3.4 总黄酮标准曲线制备

精密吸取芦丁对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中, 加入3 mL二次蒸馏水, 5%亚硝酸钠溶液0.5 mL, 混匀后放置5 min, 加入10%硝酸铝溶液0.5 mL, 混匀后放置5 min, 加入5%氢氧化钠2.5 mL, 混匀放置10 min后用二次蒸馏水定容至刻度, 配制的芦丁对照品溶液浓度分别为0、0.006 4、0.012 7、0.019 1、0.025 4、0.031 8 mg· mL-1。使用紫外分光光度计检测对照品溶液的吸光度, 以样品浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

1.3.5 精密度试验

分别取3份0.5 mL样品溶液于10 mL容量瓶中, 按1.3.3硝酸铝显色法处理后, 测定吸光度, 重复测定3次, 进行精密度试验。

1.3.6 稳定性试验

取样品溶液1份, 按1.3.3硝酸铝显色法处理之后, 分别测定显色0.5、1、1.5、2、3 h后的吸光度, 进行稳定性试验。

1.3.7 加标回收试验

分别取3份0.5 mL样品溶液于10 mL容量瓶, 按1.3.3硝酸铝显色法处理之后, 分别加入0.20、0.40、0.60 mL芦丁标准溶液混合, 二次蒸馏水定容至刻度, 测定其吸光度, 根据标准曲线计算总黄酮含量, 计算加标回收率。

1.3.8 样品总黄酮含量测定

取样品溶液3份, 按1.3.3节硝酸铝显色法处理之后, 测定吸光度, 由标准曲线获得总黄酮含量。

2 结果与分析
2.1 对照品和样品光谱扫描结果

按照硝酸铝显色法处理之后, 将对照品溶液和样品溶液在240~740 nm波长范围内进行光谱扫描, 图1可见, 对照品和样品光谱图相似程度较高, 在检测范围内有多个明显的波峰, 峰形陡峭且紧密相连。样品溶液在510 nm处有波峰, 对照品溶液在相应波长处无特征峰[8], 因此以510 nm作为检测波长。

图1 对照品和样品的扫描结果

2.2 芦丁标准曲线

以芦丁标准品浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标进行线性回归, 回归方程为y=12.767x-0.003 7, r=0.999 8, 表明芦丁标准品含量在0~0.04 mg· mL-1与吸光度呈现良好的线性关系。

2.3 精密度

精密度试验结果表明, 在510 nm下3次检测吸光度为0.305、0.305、0.303, 相对标准偏差为0.4%, 说明精密度良好。

2.4 稳定性

稳定性试验结果表明, 显色0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h时, 样品检测的吸光度基本保持稳定, 依次为0.308、0.309、0.305、0.302、0.297, 显色3 h的吸光度下降。相对标准偏差为1.6%

2.5 加标回收率

表1结果表明, 本试验中加标回收率为98.1%, 相对标准偏差为0.5%, 说明采用硝酸铝显色, 紫外可见分光光度法测定陈皮化柑橘总黄酮含量的准确度较高。

表1 加标回收率的试验结果
2.6 样品中总黄酮含量

表2结果表明, 本批次陈皮化柑橘总黄酮平均含量为61.05 mg· g-1, 相对标准偏差为0.3%。

表2 陈皮化柑橘的总黄酮含量
3 讨论

采用硝酸银显色, 可见分光光度法检测, 以510 nm为检测波长, 芦丁为对照品测定陈皮化柑橘中总黄酮的含量, 总黄酮含量为61.05 mg· g-1, 高于川陈皮中总黄酮含量[9], 表明紫外烘晒的陈皮化柑橘中含有丰富的黄酮类化合物, 具有进一步开发应用的价值[10]。

全天候紫外烘晒干燥箱的特点为短波紫外线灭菌、低温烘干, 制备的陈皮化柑橘不易腐烂, 易操控, 陈皮化效果远高于传统陈皮制作方法。利用柑橘成熟果实制作陈皮化柑橘, 开发柑橘药食两用的果茶新品, 既提升产品价值, 增加果农收益, 又符合我国农业可持续发展这一项长远战略方针。

(责任编辑:万晶)

参考文献:
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