引用本文
张益, 王琳, 郑佳铌, 王云冰, 洪莉, 董军. 南方地区樱桃砧木吉塞拉6号的组培快繁技术[J]. 浙江农业科学, 2020,61(5):884-885
[J]. ZHEJIANG NONGYE KEXUE,2020,61(5): 884-885  
doi: 10.16178/j.issn.0528-9017.20200523
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南方地区樱桃砧木吉塞拉6号的组培快繁技术
张益1, 王琳1, 郑佳铌1, 王云冰1,*, 洪莉2, 董军2
1.台州科技职业学院 农业与生物工程学院,浙江 台州 318020
2.台州市农业科学研究院 果树研究所,浙江 台州 371000
通信作者:王云冰(1984—),男,重庆彭水人,农艺师,硕士,主要从事园艺与植物组培研究工作,E-mail:63019581@qq.com。

作者简介:张益(1999—),女,浙江黄岩人,主要从事果树种苗组培技术研究工作,E-mail:1422801163@qq.com。

基金项目: 台州市科技计划(1701ny10); 2018年台州市大学生科技创新一类项目
摘要

以南方樱桃砧木吉塞拉6号为试验材料进行组培快繁技术研究。用75%乙醇和0.1%HgCl2溶液对外植体进行消毒,以MS培养基为基本培养基,添加不同浓度的激素,观察诱导效果。结果表明:75%乙醇溶液处理30 s+0.1%HgCl2处理8 min消毒效果较好,诱导成活率可达90%;增殖培养基以MS+0.8 mg·L-1 KT+0.1 mg·L-1 NAA为宜,增殖率达95%;生根培养基以1/2MS+0.1 mg·L-1 IAA+0.5 mg·L-1 IBA为宜,生根率达93%。

关键词: 樱桃; 组培快繁; 吉塞拉6号; 增殖率; 生根率
中图分类号:S662.5 文献标志码:B 文章编号:0528-9017(2020)05-0884-02

甜樱桃砧木吉塞拉6号产自德国, 是酸樱桃与灰毛叶樱桃杂交培育的品种。吉塞拉系列甜樱桃砧木适应性广, 矮化性强, 表现突出, 抗病能力强[1, 2], 但南方甜樱桃对气候有极其严格的要求, 常规种植方式育苗速度慢, 生长状况不够理想, 难以满足市场需求。采用组织培养技术可有效解决育苗难的问题, 已经有大量的樱桃或樱桃砧木建立了组培体系[3, 4, 5]。南方地区缺乏甜樱桃育苗技术, 制约了甜樱桃产业发展的问题, 为满足南方地区对甜樱桃种苗的迫切需求, 本研究建立了一套适宜南方甜樱桃砧木吉塞拉6号组织培养快繁体系, 现将研究结果报道如下。

1 材料与方法
1.1 材料

试验材料为台州市农业科学研究院的樱桃砧木吉塞拉6号, 取其幼芽为外植体, 幼芽取材时间为3月。

1.2 处理设计

1.2.1 外植体消毒

选晴朗天气摘取生长健壮、无病虫害的新生樱桃砧木吉塞拉6号的幼芽, 采用1 000倍多菌灵溶液处理, 并套袋保护15 d, 剪下幼芽备用。选取饱满幼芽, 在肥皂水中清理干净, 用流水冲洗30 min以上; 随后在无菌条件下, 用75%乙醇溶液浸没幼芽, 均匀晃动进行消毒, 无菌水冲洗3~4次, 每次约1 min, 然后用0.1%的HgCl2溶液浸没幼芽均匀晃动进行消毒, 再用无菌水冲洗3~4次, 沥干备用。其中75%乙醇处理时间分别为30、45 s, 0.1%的HgCl2溶液处理时间分别是6、8、10 min, 具体处理为:T1, 75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl2 6 min; T2, 75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl28 min; T3, 75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl2 10 min; T4, 75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl2 6 min; T5, 75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl2 8 min; T6, 75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl210 min。

所有处理的外植体接种于MS+0.5 mg· L-1 6-BA+0.2 mg· L-1 NAA+30 g· L-1蔗糖+6 g· L-1琼脂培养基上。每种处理15瓶, 每瓶接种3株。10 d后统计污染率、褐化率和成活率。

1.2.2 培养基筛选

增殖培养以MS+30 g· L-1蔗糖+6 g· L-1琼脂为基础培养基, 生根培养以1/2MS+蔗糖30 g· L-1+6 g· L-1 琼脂为基础培养基, pH值为5.8, 在不同生长时期添加不同含量的激素。

增殖培养:选取健壮、生长势良好的分化苗, 接种到含不同激素的增殖培养基上进行继代培养。试验共设置6种增殖培养基, 标记为T7~T12。各培养基均以MS为基础培养基, 每个处理中NAA均为0.1 mg· L-1, T7~T9中KT为0 mg· L-1, 6-BA分别为0.3、0.5、0.8 mg· L-1; T10~T12中, 6-BA为0 mg· L-1, KT分别为0.3、0.5、0.8 mg· L-1。每种处理接种15瓶, 每瓶接种3株。继代培养30 d, 统计分化苗的增殖率、株高和生长状况。

生根培养:将株高约1.5~3.0 cm的健壮继代增殖苗转接到生根培养基中进行培养, 试验设置6种生根培养基, 标记为T13~T18。各培养基均以1/2MS为基础培养基, 每个处理中IAA均为0.1 mg· L-1, T13~T15中IBA为0 mg· L-1, NAA分别为0.3、0.5、0.8 mg· L-1; T16~T18中NAA为0 mg· L-1, IBA分别为0.3、0.5、0.8 mg· L-1。每种处理接种15瓶, 每瓶接种3株, 放置培养室进行生根培养。生根培养30 d, 统计瓶苗的生根长度、生根率和生长状况。

2 结果与分析
2.1 消毒处理方式的影响

消毒剂对植物试验材料有一定程度的伤害, 消毒时间长, 虽然污染率会降低, 但是褐化率会升高。由表1可知, 同种消毒剂消毒不同时间对吉塞拉6号生长影响也不同。75%乙醇溶液消毒45 s, 吉塞拉6号的成活率低于消毒30 s; 随着HgCl2处理时间的延长, 污染率逐渐下降, 成活率呈先增高后下降的趋势。综合考虑, 以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min的消毒处理效果较好, 成活率达90%。

表1 消毒方式对外植体消毒效果的影响
2.2 增殖培养基的影响

表2数据表明:吉塞拉6号在T7、T12培养基中增殖率均较高, 分别为90%、95%; T12培养基中的苗生长旺盛, 叶片嫩绿; T9培养基的分化苗增殖率最低, 且叶片生长不良, 生长速度慢, 还有过度水化现象发生, 玻璃化比较严重。表明6-BA明显影响樱桃砧木的增殖, 易导致培养材料玻璃化, KT不易产生玻璃化, 是良好的替代品。综合考虑, 增殖培养基以MS+0.8 mg· L-1 KT+0.1 mg· L-1 NAA为宜。

表2 不同增殖培养基对樱桃生长的影响
2.3 生根培养基的影响

表3表明, 吉塞拉6号在T17、T18培养基中生根率较高, 分别达93%和91%, T17培养基内的增殖苗生根速度快, 一般7 d左右就有根长出, 根长适宜, 根系生长状况良好, 粗细适中, 根系白, 须根较多; T14培养基生根率最低, 长根速度慢甚至不长根。IBA比NAA生根效果略好, 综合考虑, 生根培养基以1/2MS+0.1 mg· L-1 IAA+0.5 mg· L-1 IBA为宜。

表3 不同生根培养基对樱桃生长的影响
3 小结

以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min消毒处理为宜, 诱导成活率可达90%, 且生长良好; 增殖培养基以MS+0.8 mg· L-1 KT+0.1 mg· L-1 NAA为宜, 增殖率达95%, 该培养基内生长的分化苗健壮, 生长旺盛; 生根培养基以1/2MS+0.1 mg· L-1 IAA+0.5 mg· L-1 IBA为宜, 生根率达93%。

消毒处理环节的消毒剂含量越高, 污染率越低, 褐化率越高, 成活率越低。通过试验发现, 增殖培养基中细胞分裂素6-BA含量越高, 分化苗玻璃化程度越高, 达到0.8 mg· L-1就会产生严重的玻璃化现象; 同时加入KT, 玻璃化症状消失, 这与组培中植物激素种类影响玻璃化发生的理论基本一致。在生根试验中, 各个激素的种类和配比至关重要, 是影响植株能否成活的关键。本实验分化苗的须根不多, 这还要考虑到各方面因素, 如基础培养基的影响、是否需要添加活性炭和有机物、苗的生理状态, 以及培养的环境条件等因素。

(责任编辑:侯春晓)

参考文献:
[1] 殷丽青, 陆锦明, 叶正文, 等. 甜樱桃砧木品种‘吉塞拉6号’的离体培养与快速繁殖[J]. 上海农业学报, 2015, 31(2): 51-55. [本文引用:1]
[2] 冯社章, 范继红, 纪书琴, 等. 吉塞拉的组织培养技术研究[J]. 河北农业科学, 2010, 14(10): 76-79. [本文引用:1]
[3] 徐世彦, 曹秋芬. 优良大樱桃砧木吉塞拉5号组培快繁体系构建[J]. 陕西农业科学, 2016, 62(9): 18-22. [本文引用:1]
[4] 许杰. 大樱桃砧木吉塞拉5号组培快繁技术研究[J]. 农业科技通讯, 2011(3): 38-39. [本文引用:1]
[5] 沙玉芬, 王建萍, 李公存, 等. 樱桃砧木吉塞拉6号组培快繁技术研究[J]. 山东农业科学, 2014, 46(1): 26-28. [本文引用:1]