不同激素诱导对华重楼皂苷合成关键酶基因表达的影响

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20220595

浙江农业科学 ›› 2023, Vol. 64 ›› Issue (4): 856-863.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20220595

不同激素诱导对华重楼皂苷合成关键酶基因表达的影响

田晓黎, 江丽洁, 崔琦, 刘巨钊()

浙江中医药大学药学院,浙江杭州 311402

收稿日期:2022-05-27 出版日期:2023-04-11 发布日期:2023-03-29
通讯作者: 刘巨钊
作者简介:刘巨钊(1989—),男,助理研究员,主要研究药食同源资源植物的开发与利用,E-mail: 841113678@qq.com。
田晓黎(2002—),女,本科,主要研究植物次生代谢产物分离提取。
基金资助:
国家自然科学基金(82204552);国家自然科学基金(82274280);中国博士后科学基金项目(2021M692893);中国博士后科学基金项目(2021M702927);浙江省自然科学基金(LQ22H280007);浙江省大学生新苗人才计划(2022R410A026);浙江中医药大学科研项目资助(2022JKZKTS10);浙江省中医药科技计划项目(2023ZR079);浙江省中医药科技计划项目(2023ZR087);2022年大学生创新创业训练计划(S202210344093)

Received:2022-05-27 Online:2023-04-11 Published:2023-03-29

摘要/Abstract

摘要：

以华重楼的叶为实验材料,经不同外源激素诱导后,用UPLC测定延龄草苷、薯蓣次皂苷A、重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量,通过叶片RNA提取,并结合实时荧光定量PCR分析得到关键酶基因表达的规律。结果表明,7种不同的外源激素诱导后,重楼皂苷含量均有显著提高,得到茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)作为最适合促进叶片中甾体皂苷积累的植物激素,处理效果最佳;用不同浓度MeJA诱导不同时间后,测定CYP90B52、CYP72A616、CYP94D108、CYP94D109的相对表达量,均表现为随时间增长先上升后下降的趋势,且大部分在36 h达到峰值,72 h急速降低之后缓慢下降。CYP90B52基因的相对表达量是4个基因中最高的;可以通过喷洒MeJA增加叶片中甾体皂苷等有效成分的积累,实现华重楼资源的合理开发利用。

关键词: 华重楼, 重楼皂苷, CYP基因, 茉莉酸甲酯, 植物激素

中图分类号:

S567

田晓黎, 江丽洁, 崔琦, 刘巨钊. 不同激素诱导对华重楼皂苷合成关键酶基因表达的影响[J]. 浙江农业科学, 2023, 64(4): 856-863.

图/表 4

表1 实时荧光定量PCR所需要的引物序列

引物名称	引物序列(5'-3')
CYP90B52-F	AGACCTCGTCGATGGCCTTGG
CYP90B52-R	AGCCCACACTCTCCTTCCTTCC
CYP72A616-F	GCGTCGGCTGGAGCGTTC
CYP72A616-R	TGGAGGAAGCGGTGAGATGGTG
CYP94D108-F	ACAAGCACCCCTTCCTCCTCTC
CYP94D108-R	CTTGCGGCGGCGGATGAC
CYP94D109-F	CGGAGGAAGGGAAAGGGAGAGG
CYP94D109-R	ACGGAGGAACTCGTCGGAGAAC
BAC1137	AGCGTCTTTCGGTTGACTATG
BAC116	GTGGAGAGGACACTGTTGTATG

图1 不同激素诱导后华重楼皂苷含量变化每种激素处理中的3个含量分别为处理1 d、2 d和3 d后华重楼叶片中的相应皂苷的含量。与对照组比较:a表示P>0.05, b表示P<0.05, c表示P<0.001, d表示P<0.01。

图2 CYP基因在不同时间中的相对表达量与处理6 h比较: a表示P>0.05, b表示P<0.05, c表示P<0.001, d表示P<0.01。

图3 CYP基因在不同浓度下的相对表达量与0.25 mmol·L-1比较: a表示P>0.05, b表示P<0.05, c表示P<0.001, d表示P<0.01。

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