浙江农业科学

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副猪嗜血杆菌四环素耐药基因TetB的PCR检测方法建立

1.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所,浙江 杭州310021; 2.南京农业大学 动物医学院,江苏 南京210095;3.安徽农业大学 动物科技学院,安徽 合肥230061
  




  • 出版日期:2014-12-11

  • Online:2014-12-11

摘要:

在本实验室前期研究的基础上,选取与四环素耐药表型相关性较好的TetB基因,建立PCR方法,以探索副猪嗜血杆菌耐药性的快速检测方法。本研究利用四环素主要耐药基因TetB的引物,对PCR反应条件进行优化,以副猪嗜血杆菌基因组DNA为模板,未出现非特异性扩增条带,PCR扩增条带单一。将TetB基因克隆至pMD 19T载体,以重组质粒为标准品,确定了最低检测拷贝数,经测定,最低检测拷贝数为154×103。以不同稀释度的21A7菌株基因组DNA为模板,确定了最低细菌检出量,经测定,最低检测细菌数量为46×103个。该方法为建立临床快速检测副猪嗜血杆菌耐药性奠定了基础。
 

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