摘要： 为制备免疫原以测量个体生长和繁殖过程中所释放的几丁质酶，从大型溞（Daphnia magna）体内提纯了N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC 3-2-1-52），经硫酸铵沉淀分级分离、DEAE Sephadex A-25阴离子交换柱层析和Sephadex G150分子筛柱层析纯化等步骤，酶的纯化倍数为20.09。纯酶比活力为2 243 380 U·mg-1。酶分子中各亚基的分子量分别为128，99和71 Ku。根据测试，酶促反应的米氏常数为0.300 mmol·L-1，最大反应速度为0.072 μmol·mg-1·min-1。酶催化底物分解的最适pH为7.0，最适反应温度为45 ℃；酶在值4.2～7.8的范围内活性处于高位；在不高于35 ℃的温度下处理30 min，酶活性下降不明显。至于从大型溞培养液中获得的NAGase，其催化底物分解的最适pH值为7.4，最适反应温度为40 ℃，该酶在pH 值4.6～7.8的范围内活性处于高位，在不高于40 ℃下处理30 min，酶活性下降不明显。这显示被提纯的酶和培养液中分离的酶在温度、pH以及热稳定性和酸碱稳定性方面均具有较高程度的相似性，有可能属于相同分子型。
