不同启动子eGFP载体在罗氏沼虾活体内的表达效率比较

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20212386

浙江农业科学 ›› 2022, Vol. 63 ›› Issue (1): 148-150.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20212386

不同启动子eGFP载体在罗氏沼虾活体内的表达效率比较

任晋东(), 牛宝龙, 楼宝^*()

浙江省农业科学院水生生物研究所,浙江杭州 310021

收稿日期:2021-10-13 出版日期:2022-01-11 发布日期:2021-12-29
通讯作者: 楼宝
作者简介:楼宝(1969—),男,浙江金华人,研究员,博士,研究方向为水产养殖动物繁殖生物学、增养殖学和遗传育种学,E-mail: loubao6577@163.com。
任晋东(1983—),男,河南淇县人,助理研究员,博士,研究方向为分子遗传学和动物遗传育种,E-mail: renjindong@126.com。
基金资助:
浙江省自然科学基金(LY21C190001)

Received:2021-10-13 Online:2022-01-11 Published:2021-12-29

摘要/Abstract

摘要：

为筛选出较强的启动子用于提高外源基因在罗氏沼虾活体细胞中的转化表达效率,本研究构建包含eGFP基因和IE1、hr5-IE1及Sv40启动子的3个表达载体,分别按照10 μg·g^-1标准注射于体重5~7 g的活体罗氏沼虾肌肉内,采集注射活体肌肉的RNA样品检测各个启动子转录eGFP基因的效率。结果表明,在罗氏沼虾体内hr5-IE1启动子对eGFP基因的表达活性最强,其对eGFP外源基因的转录水平是IE1的3倍以上,IE1对于eGFP的转录水平也显著高于SV40的转录启动效率,其中SV40在罗氏沼虾体内的转录启动水平未检测到eGFP基因的转录表达,表明包含节肢动物门跨物种转录调控元件(增强子hr5)的IE1启动子能够在罗氏沼虾体内正常启动下游基因的转录表达及翻译,是罗氏沼虾开展分子功能研究较优的外源基因表达启动调控元件。

中图分类号:

Q786
S966.12

任晋东, 牛宝龙, 楼宝. 不同启动子eGFP载体在罗氏沼虾活体内的表达效率比较[J]. 浙江农业科学, 2022, 63(1): 148-150.

图/表 4

图1 不同启动表达质粒的结构

表1 基因表达量qPCR用引物的序列

基因序号	引物名称	序列(5'-3')	退火温度/℃
1	β-Actin-F	GAGACCTTCAACACCCCAGC	60
	β-Actin-R	TAGGTGGTCTCGTGAATGCC
2	eGFP-F	GAAGAACGGCATCAAGGT	60
	eGFP-R	GCTCAGGTAGTGGTTGTC

图2 不同启动子组个体活体注射后的荧光检测

图3 不同启动子组eGFP相对表达量比较结果 *和**分别表示差异达到显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)水平。

参考文献 14

[1]	杨国梁, 陈雪峰, 王军毅, 等. 罗氏沼虾产业在中国持续增长的经济与社会原因分析[J]. 浙江海洋学院学报(自然科学版), 2011, 30(5):450-457.
[2]	AFLALO E D, HOANG T TT, NGUYEN V H, et al. A novel two-step procedure for mass production of all-male populations of the giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii[J]. Aquaculture, 2006, 256(1/2/3/4):468-478. DOI URL
[3]	HAN Q, DONG D D, ZHANG X J, et al. Problems with the use of liposome-and retrovirus-mediated gene transfer methods in the primary lymphoid cells of the Oka organs of the greasyback shrimp, Metapenaeusensis (De Haan, 1844)[J]. Crustaceana, 2015, 88(12/13/14):1351-1365. DOI URL
[4]	CHEN X M, CHEN Y R, SHEN X T, et al. The improvement and application of Lentivirus-mediated gene transfer and expression system in penaeid shrimp cells[J]. Marine Biotechnology, 2019, 21(1):9-18. DOI URL
[5]	杨晓菁. 抗冻蛋白基因的克隆及其在罗氏沼虾中的整合[D]. 武汉: 华中师范大学, 2004.
[6]	LI F, LI M Y, KE W, et al. Identification of the immediate-early genes of white spot syndrome virus[J]. Virology, 2009, 385(1):267-274. DOI URL
[7]	王娜, 杜希宽, 蒋明星, 等. 家蚕BmN细胞中8种启动子的活性比较及利用hr5-IE1启动子实现EGFP的稳定表达[J]. 昆虫学报, 2010, 53(3):279-285.
[8]	尹悦佳, 李楠, 崔喜艳, 等. 不同物种启动子结构特征比较[J]. 北京农业, 2014(33):35-38.
[9]	糜军, 汤宇澄, 陈诗书. RNA聚合酶Ⅲ启动子的结构与功能[J]. 生命的化学, 2000, 20(2):80-81.
[10]	高辉. 含对虾白斑综合症病毒ie1启动子的重组杆状病毒介导的哺乳动物细胞基因转移[D]. 乌鲁木齐: 新疆农业大学, 2007.
[11]	王云, 叶向群, 吴亦亮, 等. 四种启动子调控RFP报告基因在家蚕细胞(Bm-e-HNU5)内的瞬时表达[J]. 昆虫学报, 2006, 49(2):167-171.
[12]	陈茹, 龙綮新, 王珣章, 等. AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究[J]. 中山大学学报(自然科学版), 1996, 35(1):84-90.
[13]	MCELROY D, BRETTELL R I S. Foreign gene expression in transgenic cereals[J]. Trends in Biotechnology, 1994, 12(2):62-68. DOI URL
[14]	宝力德, 邸娜, 于秀敏, 等. SV40启动子在烟草体内的驱动特性研究[J]. 甘肃农业大学学报, 2015, 50(2):90-94,99.

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[1]	慎佩晶, 张宇飞, 李喜莲, 徐洋, 程海华, 陈雪峰. 5个罗氏沼虾群体微卫星遗传多样性分析[J]. 浙江农业科学, 2020, 61(11): 2377-2381.
[2]	王曙光, 李萍, 吴志强, 杨显祥, 印笋, 王如鹓, 陈正兴. 扬州市罗氏沼虾产业历史回顾及发展对策[J]. 浙江农业科学, 2019, 60(9): 1666-1668.
[3]	崔雁娜, 周聃, 郝贵杰, 周冬仁, 盛鹏程, 戴志远. 罗氏沼虾不同生长阶段肉质的变化[J]. 浙江农业科学, 2019, 60(10): 1884-1886.
[4]	翁宏飚, 沈卫锋, 牛宝龙. 罗氏沼虾病毒病检测和免疫防治进展[J]. 浙江农业科学, 2019, 60(1): 120-124.
[5]	徐瑞, 叶杰君, 邬怡静, 何芯磊, 朱友银, 陈文荣, 郭卫东, 廖芳蕾. ERF6基因在5种柑橘属植物的表达差异及启动子分析[J]. 浙江农业科学, 2018, 59(5): 731-737.
[6]	焦蓉婷, 沈强, 叶捷. 菌藻联合处理罗氏沼虾育苗废水的效果[J]. 浙江农业科学, 2018, 59(12): 2286-2288.