重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20220853

浙江农业科学 ›› 2023, Vol. 64 ›› Issue (1): 79-82.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20220853

重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立

陈吴健¹(), 张巧琦¹, 魏晓洁¹, 朱青青¹, 郭利川², 应清界², 梅高甫³, 曹栋栋³^,^*()

1.杭州海关技术中心,浙江杭州 310016
2.江苏奇天基因生物科技有限公司,江苏无锡 214000
3.浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所浙江省数字旱粮重点实验室,浙江杭州 310021

收稿日期:2022-08-19 出版日期:2023-01-11 发布日期:2023-01-11
通讯作者: 曹栋栋
作者简介:曹栋栋(1983—),男,浙江宁波人,副研究员,博士,研究方向为种子科学与工程,E-mail:jellycao@163.com。
陈吴健(1983—),男,浙江仙居人,高级农艺师,硕士,研究方向为植物病菌真菌、线虫的检疫鉴定,E-mail:cwj@zaiq.org.cn。

Received:2022-08-19 Online:2023-01-11 Published:2023-01-11

摘要/Abstract

摘要：

本文通过重组酶介导的核酸扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)建立一种快速检测油菜茎基溃疡病菌的方法。根据油菜茎基溃疡病菌的特异基因LMR1-D保守序列设计引物和探针,分析建立的RAA方法的灵敏度和特异性。该方法在39 ℃下,反应时间段(<20 min),检测下限可达10拷贝·mL^-1,与油菜黑胫病菌等近似种无交叉反应,具有良好的特异性。本研究建立的RAA方法反应速度快、特异性强、灵敏度高,适用于油菜茎基溃疡病菌的快速检测。

关键词: 核酸扩增技术, 油菜, 茎基溃疡病菌, 重组酶介导扩增, 种传病害

中图分类号:

S432.44

陈吴健, 张巧琦, 魏晓洁, 朱青青, 郭利川, 应清界, 梅高甫, 曹栋栋. 重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立[J]. 浙江农业科学, 2023, 64(1): 79-82.

图/表 5

参考文献 16

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菌株	学名	编号	寄主	来源
油菜茎基溃疡病菌	Leptosphaeria maculans	2013-ZS-L01	油菜	加拿大
油菜黑胫病菌	Leptosphaeria biglobosa	2013-ZS-L03	油菜	澳大利亚
芸苔链格孢菌	Alternaria brassicae	2012-JC-04	油菜	日本
互生交链孢霉	Alternaria alternata	2013-JC-09	青菜	日本
富氏葡萄孢盘菌	Botryotinia fuckeliana	2015-ZS-15	油菜	中国
芸苔生尾孢	Cercospora brassicicola	2012-JC-10	青菜	中国
葡萄茎枯病菌	Phoma glomerata	2014-HZ-06	苹果	意大利
核盘菌	Sclerotinia sclerotiorum	2014-JX-06	油菜	中国

菌株	学名	编号	寄主	来源
油菜茎基溃疡病菌	Leptosphaeria maculans	2013-ZS-L01	油菜	加拿大
油菜黑胫病菌	Leptosphaeria biglobosa	2013-ZS-L03	油菜	澳大利亚
芸苔链格孢菌	Alternaria brassicae	2012-JC-04	油菜	日本
互生交链孢霉	Alternaria alternata	2013-JC-09	青菜	日本
富氏葡萄孢盘菌	Botryotinia fuckeliana	2015-ZS-15	油菜	中国
芸苔生尾孢	Cercospora brassicicola	2012-JC-10	青菜	中国
葡萄茎枯病菌	Phoma glomerata	2014-HZ-06	苹果	意大利
核盘菌	Sclerotinia sclerotiorum	2014-JX-06	油菜	中国

引物/ 探针	序列(5'-3')	扩增子长度/bp
F	CGCCTAGGTTGCCCTAACCTAGAATCTATAAG	133
R	CTRCTACTGCTGCTAAGCTTACGCGCAAGGC
P	CTTAGAGGAGCTAGAGTCCTTATCTTC(FAM-dT)A(THF) (BHQ-dT)AAGGAGCTCTAGGC

引物/ 探针	序列(5'-3')	扩增子长度/bp
F	CGCCTAGGTTGCCCTAACCTAGAATCTATAAG	133
R	CTRCTACTGCTGCTAAGCTTACGCGCAAGGC
P	CTTAGAGGAGCTAGAGTCCTTATCTTC(FAM-dT)A(THF) (BHQ-dT)AAGGAGCTCTAGGC

重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立

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