浙江农业科学 ›› 2018, Vol. 59 ›› Issue (6): 1010-1014.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20180646

• 食品技术 • 上一篇    下一篇

Methylocorus sp. MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究

孙宇桐, 邹琪琪, 孙菊鲜, 孙晓宇, 齐姗姗, 辛琪, 葛欣*   

  1. 河北大学 生命科学学院,河北 保定 071002
  • 收稿日期:2018-03-27 出版日期:2018-06-11
  • 通讯作者: 葛 欣(1982—),男,河北保定人, 副研究员,博士,主要研究方向为微生物学,E-mail:gexin88888@sina.com
  • 作者简介:孙宇桐(1993—),女,黑龙江牡丹江人,硕士,主要研究方向为微生物学,E-mail: 761126738@qq.com。
  • 基金资助:
    河北省自然科学基金(C2015201157,C2015201156); 河北省高等学校科学技术研究项目(BJ2016008)

  • Received:2018-03-27 Online:2018-06-11

摘要: Methylocorus sp. MP 688 菌株具有高产吡咯喹啉醌的特性而应用于工业生产当中。分析其全基因组及代谢通路,发现在C1固定中丝氨酸循环起到重要的生理作用。为了研究丝氨酸循环中glyA基因是否具有表达丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)活性及基因缺失是否会对菌株生命活动产生影响。采用体外表达方式,纯化并检测glyA基因产物SHMT酶是否具有催化活性。通过双交换实验进行glyA基因敲除,探究glyA基因缺失是否会对菌株产生影响。结果表明,glyA 基因成功在体外表达,双交换敲除实验证明glyA基因作为关键基因存在,其缺失或可致死。此外,SHMT酶在35 ℃,pH值7.5缓冲体系中酶促效率最高,还原剂β-巯基乙醇对SHMT酶催化活性具有促进作用。

关键词: glyA基因, 丝氨酸羟甲基转移酶, 体外表达, 双交换敲除

中图分类号: