Methylocorus sp. MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20180646

浙江农业科学 ›› 2018, Vol. 59 ›› Issue (6): 1010-1014.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20180646

Methylocorus sp. MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究

孙宇桐, 邹琪琪, 孙菊鲜, 孙晓宇, 齐姗姗, 辛琪, 葛欣^*

河北大学生命科学学院,河北保定 071002

收稿日期:2018-03-27 出版日期:2018-06-11
通讯作者: 葛欣(1982—),男,河北保定人, 副研究员,博士,主要研究方向为微生物学,E-mail:gexin88888@sina.com。
作者简介:孙宇桐(1993—),女,黑龙江牡丹江人,硕士,主要研究方向为微生物学,E-mail: 761126738@qq.com。
基金资助:
河北省自然科学基金(C2015201157,C2015201156); 河北省高等学校科学技术研究项目(BJ2016008)

Received:2018-03-27 Online:2018-06-11

摘要/Abstract

摘要： Methylocorus sp. MP 688 菌株具有高产吡咯喹啉醌的特性而应用于工业生产当中。分析其全基因组及代谢通路,发现在C1固定中丝氨酸循环起到重要的生理作用。为了研究丝氨酸循环中glyA基因是否具有表达丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)活性及基因缺失是否会对菌株生命活动产生影响。采用体外表达方式,纯化并检测glyA基因产物SHMT酶是否具有催化活性。通过双交换实验进行glyA基因敲除,探究glyA基因缺失是否会对菌株产生影响。结果表明,glyA 基因成功在体外表达,双交换敲除实验证明glyA基因作为关键基因存在,其缺失或可致死。此外,SHMT酶在35 ℃,pH值7.5缓冲体系中酶促效率最高,还原剂β-巯基乙醇对SHMT酶催化活性具有促进作用。

关键词: glyA基因, 丝氨酸羟甲基转移酶, 体外表达, 双交换敲除

中图分类号:

孙宇桐, 邹琪琪, 孙菊鲜, 孙晓宇, 齐姗姗, 辛琪, 葛欣. Methylocorus sp. MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究[J]. 浙江农业科学, 2018, 59(6): 1010-1014.

参考文献

[1] XIONG X H, ZHI J J, YANG L, et al.Complete genome sequence of the bacterium Methylovorus sp. strain MP688, a high-level producer of pyrroloquinolone quinone[J]. Journal of Bacteriology, 2011, 193(4):1012-1013.
[2] CHISTOSERDOVA L, CHEN S W, LAPIDUS A, et al.Methylotrophy in Methylobacterium extorquens AM1 from a genomic point of view[J]. Bacteriology, 2003, 185(10): 2980-2987.
[3] 李大攀,葛欣,魏静远,等. 甲基营养菌 MP688甲醇脱氢酶基因mpq1818的敲除及功能研究[J]. 生物技术通讯, 2015, 25(5):632-635.
[4] NAYAK D D, MARX C J.Genetic and phenotypic comparison of facultative methylotrophy between Methylobacterium extorquens strains PA1 and AM1[J]. PLoS ONE, 2014, 9(9):e107887.
[5] 奥斯伯, 布伦特, 金斯顿, 等.精编分子生物学实验指南[M]. 北京: 科学出版社, 1998.
[6] CHISTOSERDOVA L V, LIDSTROM M E.Genetics of the serine cycle in Methylobacterium extorquens AM1: Cloning, sequence, mutation, and physiological effect of glyA, the gene for serine hydroxymethyltransferase[J]. American Society for Microbiology, 1994, 176(21):6759-6763.
[7] 沈天翔,那淑敏,喻国策,等. 大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA)的克隆和表达[J]. 微生物学报, 1997, 37(6): 423-428.
[8] FLORIO R, DI SALVO M L, VIVOLI M, et al. Serine hydroxymethyl-transferase: A model enzyme for mechanistic, structural, and evolutionary studies[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Proteins and Proteomics, 2010, 1814(11): 1489-1496.
[9] DIJKMAN W P, FRAAIJE M W.Discovery and characterization of a 5-hydroxymethylfurfural oxidase from Methylovorus sp. strain MP688[J]. Applied Environmental Microbiology, 2014, 80(3):1082-1090.
[10] GE X, WANG W, HAN Y, et al.Methylovorus sp. MP688 exopolysaccharides contribute to oxidative defense and bacterial survival under adverse condition[J]. World Journal of Microbiology & Biotechnology, 2013, 29(12):2249-2258.

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[1]	丁霖, 彭城, 殷海军, 陈笑芸, 徐俊锋, 李玥莹. 基因组编辑技术及其检测鉴定方法研究进展[J]. 浙江农业科学, 2019, 60(2): 274-280.
[2]	常瑞刚, 刘丽霞. 八眉猪基因组DNA提取方法比较[J]. 浙江农业科学, 2017, 58(4): 711-711.