白花油茶胚性愈伤诱导及植株再生

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20220661

摘要/Abstract

摘要：

本研究以白花油茶未成熟胚为外植体,对其消毒方式及胚性愈伤组织培养进行研究。结果表明,未剥果皮的外植体先用75%乙醇浸泡60 s后转入0.1% HgCl₂浸泡8 min,再转入2% NaClO中浸泡8 min,成活率最高,达86.67%。未成熟胚切块接种于MS+0.5 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA中,胚性愈伤组织诱导最好,诱导率最高,达89.63%;将绿色愈伤组织转接至MS+0.2 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA时,愈伤组织表面及其周围产生大量体细胞胚,呈球形、心形、鱼雷状和子叶状等多种形状,且多种相互重叠生长,胚状体诱导率最高,达68.89%;不同配比的6-BA和NAA诱导体细胞胚产生不定芽的效率差异明显,其中2.25 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA和3.0 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-1 IBA不定芽分化效果最好,诱导率均达90%以上。待不定芽长至1.5~2.0 cm切下进行生根培养,发现添加5 mg·L^-1 NAA和添加5 mg·L^-1 NAA+5 mg·L^-1 IBA的生根效果较好,分别达77.78%和81.11%,前者只有主根,侧根较少产生,后者主根生长健壮,侧根稠密。初步建立了白花油茶胚性愈伤组织诱导及植株再生体系,为遗传转化提供技术支撑。

关键词: 白花油茶, 未成熟胚, 胚性愈伤组织, 不定芽分化, 生根, 植株再生

中图分类号:

S606

王江英, 汤雪燕, 葛金涛, 朱朋波, 孙明伟, 赵统利, 邵小斌. 白花油茶胚性愈伤诱导及植株再生[J]. 浙江农业科学, 2023, 64(4): 841-845.

图/表 9

参考文献 12

[1]	王瑞, 陈永忠, 王湘南, 等. 油茶组培苗高效增殖体系的建立[J]. 中南林业科技大学学报, 2015, 35(10): 40-43.
[2]	陈永忠, 杨小胡, 彭邵锋, 等. 我国油茶良种选育研究现状及发展策略[J]. 林业科技开发, 2005, 19(4): 1-4.
[3]	张智俊, 罗淑萍, 李亚玲, 等. 油茶优良无性系子叶体细胞胚植株再生[J]. 植物学通报, 2005, 40(S1): 43-49.
[4]	王蒂, 陈劲枫. 植物组织培养[M]. 2版. 北京: 中国农业出版社, 2013.
[5]	杨凯. 耐冬山茶胚状体和胚性愈伤组织诱导研究[J]. 青岛农业大学学报(自然科学版), 2013, 30(3): 184-187, 199.
[6]	张志兰. 山茶花组织培养过程中的防外植体褐化试验[J]. 西部林业科学, 2007, 36(2): 118-121.
[7]	高洁, 张萍, 薛璟祺, 等. 酚类物质及其对木本植物组织培养褐变影响的研究进展[J]. 园艺学报, 2019, 46(9): 1645-1654.
[8]	毕方铖, 谭晓风, 张智俊, 等. 油茶离体培养诱导再生植株的研究[J]. 经济林研究, 2004, 22(2): 5-9.
[9]	唐国涛, 张汉永, 黄锦荣, 等. 油茶组织培养繁殖技术初步研究[J]. 广东林业科技, 2014, 30(3): 25-29.
[10]	杨顺兴, 罗世琼, 杨占南, 等. 油茶植物组织培养研究进展[J]. 分子植物育种, 2013, 30(3): 184.
[11]	黄莉雅. 油茶组织培养初步研究[D]. 长沙: 中南林业科技大学, 2010.
[12]	王以红, 吴幼媚, 蔡玲, 等. 油茶岑软3号芽器官离体培养再生植株的研究[J]. 西部林业科学, 2011, 40(4): 1-4.

处理	消毒方式	褐化率/%	污染率/%	死亡率/%	成活率/%
1	未剥果皮75%乙醇30 s+0.1% HgCl₂ 5 min+2% NaClO 5 min	0.74±1.05 c	36.30±6.37 a	0.74±1.05 d	62.22±6.54 bc
2	未剥果皮75%乙醇45 s+0.1% HgCl₂ 5 min+2% NaClO 5 min	2.22±1.81 c	25.19±2.77 b	1.48±2.10 cd	71.11±6.54 b
3	未剥果皮75%乙醇60 s+0.1% HgCl₂ 8 min+2% NaClO 8 min	2.22±1.81 c	9.63±2.77 c	1.48±1.05 cd	86.67±4.80 a
4	剥果皮75%乙醇30 s+0.1% HgCl₂ 10 min	14.07±2.77 b	24.44±4.80 b	5.93±1.05 c	55.56±6.54 c
5	剥果皮75%乙醇45 s+0.1% HgCl₂ 8 min	21.48±4.57 a	8.15±2.77 c	10.37±1.05 b	60.00±6.54 bc
6	剥果皮75%乙醇60 s+0.1% HgCl₂ 8 min	22.22±4.80 a	2.96±2.77 c	16.30±3.78 a	58.52±3.78 bc

处理	消毒方式	褐化率/%	污染率/%	死亡率/%	成活率/%
1	未剥果皮75%乙醇30 s+0.1% HgCl₂ 5 min+2% NaClO 5 min	0.74±1.05 c	36.30±6.37 a	0.74±1.05 d	62.22±6.54 bc
2	未剥果皮75%乙醇45 s+0.1% HgCl₂ 5 min+2% NaClO 5 min	2.22±1.81 c	25.19±2.77 b	1.48±2.10 cd	71.11±6.54 b
3	未剥果皮75%乙醇60 s+0.1% HgCl₂ 8 min+2% NaClO 8 min	2.22±1.81 c	9.63±2.77 c	1.48±1.05 cd	86.67±4.80 a
4	剥果皮75%乙醇30 s+0.1% HgCl₂ 10 min	14.07±2.77 b	24.44±4.80 b	5.93±1.05 c	55.56±6.54 c
5	剥果皮75%乙醇45 s+0.1% HgCl₂ 8 min	21.48±4.57 a	8.15±2.77 c	10.37±1.05 b	60.00±6.54 bc
6	剥果皮75%乙醇60 s+0.1% HgCl₂ 8 min	22.22±4.80 a	2.96±2.77 c	16.30±3.78 a	58.52±3.78 bc

处理	激素组合	诱导率/%	愈伤组织颜色及生长状态
1	0.2 mg·L^-1 2,4-D+1.0 mg·L^-1 6-BA	17.04±2.77 e	白色,生长慢,颗粒小
2	0.2 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA	42.22±4.80 d	淡黄色,生长慢,颗粒小
3	0.2 mg·L^-1 2,4-D+3.0 mg·L^-1 6-BA	50.37±3.78 cd	淡黄色,生长缓慢,颗粒小
4	0.5 mg·L^-1 2,4-D+1.0 mg·L^-1 6-BA	59.26±3.78 c	淡黄至浅绿,生长一般,颗粒中等
5	0.5 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA	89.63±2.77 a	浅绿至绿色,生长快,长势良好,颗粒蓬松
6	0.5 mg·L^-1 2,4-D+3.0 mg·L^-1 6-BA	68.15±5.83 b	浅绿色,生长一般,颗粒紧实
7	1.0 mg·L^-1 2,4-D+1.0 mg·L^-1 6-BA	41.48±2.77 d	淡黄色,生长慢,颗粒小
8	1.0 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA	68.89±4.80 b	浅绿色,生长一般,颗粒紧实
9	1.0 mg·L^-1 2,4-D+3.0 mg·L^-1 6-BA	47.41±4.57 d	淡黄色,生长缓慢,颗粒小

处理	激素组合	诱导率/%	愈伤组织颜色及生长状态
1	0.2 mg·L^-1 2,4-D+1.0 mg·L^-1 6-BA	17.04±2.77 e	白色,生长慢,颗粒小
2	0.2 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA	42.22±4.80 d	淡黄色,生长慢,颗粒小
3	0.2 mg·L^-1 2,4-D+3.0 mg·L^-1 6-BA	50.37±3.78 cd	淡黄色,生长缓慢,颗粒小
4	0.5 mg·L^-1 2,4-D+1.0 mg·L^-1 6-BA	59.26±3.78 c	淡黄至浅绿,生长一般,颗粒中等
5	0.5 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA	89.63±2.77 a	浅绿至绿色,生长快,长势良好,颗粒蓬松
6	0.5 mg·L^-1 2,4-D+3.0 mg·L^-1 6-BA	68.15±5.83 b	浅绿色,生长一般,颗粒紧实
7	1.0 mg·L^-1 2,4-D+1.0 mg·L^-1 6-BA	41.48±2.77 d	淡黄色,生长慢,颗粒小
8	1.0 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA	68.89±4.80 b	浅绿色,生长一般,颗粒紧实
9	1.0 mg·L^-1 2,4-D+3.0 mg·L^-1 6-BA	47.41±4.57 d	淡黄色,生长缓慢,颗粒小

处理	激素组合	胚状体诱导率/%	生长状态
1	0.1 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA	33.33±34.07 ef	淡黄色,生长慢,具少量小颗粒球形胚
2	0.1 mg·L^-1 NAA+2.0 mg·L^-1 6-BA	49.63±4.57 bc	浅绿色,生长一般,具少量球形和心形胚,偶见鱼雷和子叶胚
3	0.1 mg·L^-1 NAA+4.0 mg·L^-1 6-BA	45.19±2.77 bcd	淡黄色,生长慢,具少量球形和心形胚
4	0.2 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA	68.89±4.80 a	浅绿至绿色,水润光泽,生长旺盛,具多种形态体细胞胚
5	0.2 mg·L^-1 NAA+2.0 mg·L^-1 6-BA	46.67±2.77 bc	淡黄色,生长慢,具少量球形和心形胚
6	0.2 mg·L^-1 NAA+4.0 mg·L^-1 6-BA	43.70±2.77 cd	淡黄色,生长慢,具少量球形和心形胚
7	0.5 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA	52.59±3.78 b	浅绿色,生长一般,具少量球形和心形胚,偶见鱼雷和子叶胚
8	0.5 mg·L^-1 NAA+2.0 mg·L^-1 6-BA	37.78±3.63 de	淡黄色,生长慢,具少量小颗粒球形胚
9	0.5 mg·L^-1 NAA+4.0 mg·L^-1 6-BA	27.41±2.77 f	淡黄色,生长慢,具少量小颗粒球形胚