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nisⅠ基因克隆和强化表达及其发酵条件的优化

  

  1. (1浙江工业大学 生物工程学院,浙江 杭州310014; 2浙江新银象生物工程有限公司,浙江 天台317200)
  • 出版日期:2016-08-11

  • Online:2016-08-11

摘要: nisⅠ基因能提高乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)产nisin的效价。本文自行设计引物,从乳酸乳球菌克隆获得了nisⅠ基因,构建了重组质粒pMG36enisⅠ并电转化至乳酸乳球菌中,经筛选得到1株阳性转化子。考查了基因工程菌及原始菌株在不同时期nisⅠ基因的表达量,结果表明,重组菌在6、9、12 h的表达量比原始菌株分别提高了044、153、228倍。在摇瓶培养条件下,通过单因素研究和响应面法优化了重组菌的发酵培养基和培养条件,优化结果为:蔗糖267 g·L-1、蛋白胨2268 g·L-1、酵母粉7 g·L-1、牛肉膏7 g·L-1、Na2HPO4 218 g·L-1、MgSO4 02 g·L-1,最适pH值75,最佳接种量3%,发酵时间12 h,在该条件下,重组菌的nisin发酵水平比原始菌株提高了7542%。因此,在乳酸乳球菌中强化nisⅠ基因的表达是有效的。

关键词: nisin, PCR, 表达量, 发酵, 优化