AtNPR1和Cecropin B基因共表达载体的构建

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20200541

浙江农业科学 ›› 2020, Vol. 61 ›› Issue (5): 940-942.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20200541

AtNPR1和Cecropin B基因共表达载体的构建

孙立方, 柯甫志, 聂振朋, 王平, 孙建华, 徐建国^*

浙江省柑橘研究所,国家柑橘品种改良中心浙江分中心,浙江台州 318026

收稿日期:2020-03-19 出版日期:2020-05-11
通讯作者: 徐建国(1962—),男,浙江台州人,研究员,硕士,主要从事柑橘育种和品种改良等工作,E-mail: xjggjs@sohu.com。
作者简介:孙立方(1986—),男,河南商丘人,助理研究员,博士,主要从事柑橘功能基因挖掘、功能验证和遗传转化等工作,E-mail: sun6286855@126.com。
基金资助:
国家现代农业(柑桔)产业技术体系岗位科学家项目(CARS-26); 浙江省农业(果品)新品种选育重大科技专项(2016C2052-1); 浙江省农业科学院青年人才培养项目(10102000618AN0101F/005); 浙江省农业科学院扶持学科(柑橘育种)项目; 台州优势水果产业技术创新团队项目

Received:2020-03-19 Online:2020-05-11

摘要/Abstract

摘要： 柑橘病害严重影响其外观、品质和产量,给生产带来损失。本研究利用LP4/2A作为连接肽,构建AtNPR1和抗菌肽Cecropin B基因的共表达载体,为后期转化柑橘获得抗病材料做准备。以实验室前期构建的质粒为模板扩增AtNPR1基因,并人工合成连接肽LP4/2A和抗菌肽Cecropin B基因的编码序列。利用重叠PCR将AtNPR1和LP4/2A-Cecropin B重组,并连接至表达载体pBI121,获得以35S为启动子的35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的共表达载体。同时,本研究还进一步将35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的表达载体中35S启动子序列替换为韧皮部特异性启动子GRP1.8的序列,成功获得GRP1.8:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的特异性共表达载体。目前,35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B和GRP1.8:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B共表达载体均构建完成并已成功转入农杆菌GV3101。抗病基因AtNPR1和Cecropin B共表达载体的构建将为以后转化和筛选转基因抗病柑橘准备材料。

关键词: AtNPR1, Cecropin B, 共表达, 载体构建, 抗病

中图分类号:

S436.66

孙立方, 柯甫志, 聂振朋, 王平, 孙建华, 徐建国. AtNPR1和Cecropin B基因共表达载体的构建[J]. 浙江农业科学, 2020, 61(5): 940-942.

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