超高效液相色谱-串联质谱法测定菊花15种吡咯里西啶生物碱毒素

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20211151

摘要/Abstract

摘要：

建立菊花15种吡咯里西啶生物碱毒素(天芥菜碱、天芥菜碱-N-氧化物、倒千里光碱、倒千里光碱-N-氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱-N-氧化物、千里光碱、千里光碱-N-氧化物、促黑激素、促黑激素-N-氧化物、千里光菲灵碱、千里光菲灵碱-N-氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱-N-氧化物、克氏千里光碱)含量的液相色谱-串联质谱测定方法。采用硫酸溶液提取菊花样品中吡咯里西啶生物碱毒素,离心后将上清液过Oasis MCX固相萃取小柱净化,氮气吹干后复溶,采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析。采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱,流动相以0.1%(V/V)甲酸水溶液-甲醇体系进行梯度洗脱,采用ESI源正离子电离模式,通过多反应离子监测模式进行检测,采用基质校准外标法进行定量。15种吡咯里西啶生物碱毒素在相关浓度范围内相关系数均大于0.999,线性关系好;其中,检出限为0.5~9.0 μg·kg^-1,定量限为1.7~30.0 μg·kg ^-1;阴性菊花添加样品的回收率为82.6%~94.2%,相对标准偏差为2.3%~5.0%(n=5)。该方法检测耗时短,具有较高精密度和准确度,具备同时测定菊花样品中多种吡咯里西啶生物碱毒素的能力。

关键词: 超高效液相色谱-串联质谱法, 菊花, 吡咯里西啶生物碱毒素, 固相萃取柱

中图分类号:

O657.63
S68

章豪, 吴银良, 朱勇, 赵健, 陈国. 超高效液相色谱-串联质谱法测定菊花15种吡咯里西啶生物碱毒素[J]. 浙江农业科学, 2021, 62(11): 2286-2290.

图/表 4

参考文献 22

[1]	HUANG Z, CHEN M, ZHANG J, et al. Integrative analysis of hepatic microRNA and mRNA to identify potential biological pathways associated with monocrotaline-induced liver injury in mice[J]. Toxicology and Applied Pharmacology, 2017, 333:35-42. DOI URL
[2]	孙潇翔, 向娥, 邱帅凯, 等. 吡咯里西啶生物碱毒性作用研究进展[J]. 中国药物警戒, 2019, 16(2):76-80.
[3]	ROEDER E. Medicinal plants in China containing pyrrolizidine alkaloids[J]. Pharmazie, 2000, 55(10):711-726.
[4]	高江国, 王长虹, 李岩, 等. 吡咯里西啶生物碱的药理作用、毒性及药(毒)物代谢动力学研究进展[J]. 中国中药杂志, 2009, 34(5):506-511.
[5]	KENTALA E, KAILA T, KANTO J. Intramuscular atropine in elderly people: pharmacokinetic studies using the radioreceptor assay and some pharmacodynamic responses[J]. Pharmacol Toxicol, 1989, 65:110-112. DOI URL
[6]	GANDIA P, SAIVIN S, LETRAON A P, et al. Influence of simulated weightlessness on the intramuscular and oral pharmacokinetics of promethazine in 12 human volunteers[J]. Journal of Clinical Pharmacology, 2006, 46(9):1008-1016. DOI URL
[7]	张芳, 王长虹, 王峥涛. 植物中吡咯里西啶生物碱的检测与分析[J]. 天然产物研究与开发, 2006, 18(6):1057-1063.
[8]	陈莹, 季莉莉, 马鸿雁, 等. 吡咯里西啶生物碱Jacoline对人正常肝L-02细胞内谷胱甘肽含量及还原酶活性的影响[J]. 上海中医药大学学报, 2008, 22(2):35-38.
[9]	JIA Z J, TAKAYAMA H, FUTAMURA Y, et al. Catalytic enantioselective synjournal of a pyrrolizidine-alkaloid-inspired compound collection with antiplasmodial activity[J]. Journal of Organic Chemistry, 2018, 83(13):7033-7041. DOI URL
[10]	熊爱珍, 杨莉, 杨雪晶, 等. UPLC-MS同时测定千里光和欧洲千里光中阿多尼弗林碱和千里光碱的含量[J]. 中国中药杂志, 2011, 36(6):702-705.
[11]	LIN G, WANG J Y, LI N, et al. Hepatic sinusoidal obstruction syndrome associated with consumption of Gynura segetum[J]. Journal of Hepatology, 2011, 54:666-673. DOI URL
[12]	李丽梅, 张涵庆, 吕寒, 等. 白背三七叶中吡咯里西啶生物碱的LC-MSn检测[J]. 植物资源与环境学报, 2008, 17(2):79-80.
[13]	PARET G, MAZKERETH R, SELLA R, et al. Atropine pharmacokinetics and pharmaco-dynamics following endotracheal versus endobronchial administration in dogs[J]. Resuscitation, 1999, 41(1):57-62. DOI URL
[14]	渡社班, 徐德然, 张勉, 等. 橐吾属植物中肝毒吡咯里西啶生物碱的LC/MSn检测[J]. 药学学报, 2004, 39(10):831-835.
[15]	程莉, 王丹, 周爽, 等. 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱[J]. 环境化学, 2014, 33(11):1971-1977.
[16]	AVULA B, SAGI S, WANG Y H, et al. Characterization and screening of pyrrolizidine alkaloids and N-oxides from botanicals and dietary supplements using UHPLC-high resolution mass spectrometry[J]. Food Chemistry, 2015, 178:136-148. DOI URL
[17]	濮社班, 徐德然, 张勉, 等. 中药款冬中肝毒吡咯里西啶生物碱的LC/MSn检测[J]. 中国天然药物, 2004, 2(5):293-297.
[18]	JANK B, RATH J. The risk of pyrrolizidine alkaloids in human food and animal feed[J]. Trends in Plant Science, 2017, 22:191-193. DOI URL
[19]	宁娱, 祝晨蔯, 莫洁丽, 等. HPLC法测定一点红中克氏千里光碱的含量[J]. 中国药品标准, 2014, 15(4):269-272.
[20]	PRELIASCO M, GARDNER D, MORAES J, et al. Senecio grisebaehii baker: pyrrolizidine alkaloids and experimental poisoning in calves[J]. Toxicon, 2017, 133:68-73. DOI URL
[21]	陈丽华, 王钧篪, 乔月, 等. 基于UPLC-MS/MS同时测定番泻叶中吡咯里西啶生物碱的含量[J]. 中国现代中药, 2019, 21(7):931-936.
[22]	王军, 王长虹, 王峥涛, 等. 吡咯里西啶生物碱的细胞毒性及致毒机制研究进展[J]. 国际药学研究杂志, 2007, 34(4):246-249.

PAs毒素	母离子 (m/z)	子离子 (m/z)	锥孔电压/V	碰撞能量/eV
克氏千里光碱	366.20	168.09^*	31	27
		122.16		31
倒千里光碱-N-氧化物	368.18	94.06^*	5	41
		117.86		31
倒千里光碱	352.18	120.14^*	57	27
		138.09		27
千里光碱-N-氧化物	368.18	120.08^*	13	35
		296.18		25
欧天芥菜碱-N-氧化物	346.17	172.12^*	59	31
		111.10		41
千里光宁碱-N-氧化物	352.20	93.99^*	5	39
		136.08		39
千里光宁碱	336.18	120.14^*	87	27
		93.99		31
天芥菜碱-N-氧化物	330.23	172.12^*	63	27
		111.10		37
千里光菲灵碱-N-氧化物	350.18	94.18^*	39	31
		119.82		31
千里光菲灵碱	334.18	120.14^*	43	27
		138.09		27
天芥菜碱	314.23	138.10^*	13	19
		156.11		25
促黑激素-N-氧化物	316.18	172.11^*	45	27
		138.10		25
千里光碱	352.24	120.07^*	17	31
		155.13		25
欧天芥菜碱	330.23	138.10^*	53	17
		254.16		17
促黑激素	300.21	94.12^*	35	25
		138.10		17

PAs毒素	母离子 (m/z)	子离子 (m/z)	锥孔电压/V	碰撞能量/eV
克氏千里光碱	366.20	168.09^*	31	27
		122.16		31
倒千里光碱-N-氧化物	368.18	94.06^*	5	41
		117.86		31
倒千里光碱	352.18	120.14^*	57	27
		138.09		27
千里光碱-N-氧化物	368.18	120.08^*	13	35
		296.18		25
欧天芥菜碱-N-氧化物	346.17	172.12^*	59	31
		111.10		41
千里光宁碱-N-氧化物	352.20	93.99^*	5	39
		136.08		39
千里光宁碱	336.18	120.14^*	87	27
		93.99		31
天芥菜碱-N-氧化物	330.23	172.12^*	63	27
		111.10		37
千里光菲灵碱-N-氧化物	350.18	94.18^*	39	31
		119.82		31
千里光菲灵碱	334.18	120.14^*	43	27
		138.09		27
天芥菜碱	314.23	138.10^*	13	19
		156.11		25
促黑激素-N-氧化物	316.18	172.11^*	45	27
		138.10		25
千里光碱	352.24	120.07^*	17	31
		155.13		25
欧天芥菜碱	330.23	138.10^*	53	17
		254.16		17
促黑激素	300.21	94.12^*	35	25
		138.10		17

PAs毒素	标准曲线	R²	检出限/(μg·kg^-1)	定量限/(μg·kg^-1)	基质效应/%
克氏千里光碱	y=55 600x-3 528	0.999 5	0.9	3.0	96.6
倒千里光碱-N-氧化物	y=1 950x-14.91	0.999 4	9.0	30.0	101.3
倒千里光碱	y=9 876x-610.4	0.999 5	1.8	6.0	107.1
千里光碱-N-氧化物	y=16 840x-1 102	0.999 2	1.5	5.0	106.3
欧天芥菜碱-N-氧化物	y=74 440x-564.4	0.999 3	0.8	2.7	92.5
千里光宁碱-N-氧化物	y=9 641x-807.0	0.999 6	1.8	6.0	97.9
千里光宁碱	y=19 100x-51.1	0.999 4	1.5	5.0	106.2
天芥菜碱-N-氧化物	y=75 810x-901	0.999 5	0.8	2.7	98.4
千里光菲灵碱-N-氧化物	y=8 207x-605.8	0.999 6	2.5	8.3	102.2
千里光菲灵碱	y=18 720x-972	0.999 7	1.5	5.0	106.5
天芥菜碱	y=122 400x-11 360	0.999 6	0.5	1.7	99.1
促黑激素-N-氧化物	y=35 410x-3 953	0.999 2	1.2	4.0	89.5
千里光碱	y=7 978x-461	0.999 5	2.5	8.3	111.2
欧天芥菜碱	y=104 600x-3 996	0.999 6	0.6	2.0	98.5
促黑激素	y=97 300x-2 394	0.999 3	0.6	2.0	106.9

PAs毒素	标准曲线	R²	检出限/(μg·kg^-1)	定量限/(μg·kg^-1)	基质效应/%
克氏千里光碱	y=55 600x-3 528	0.999 5	0.9	3.0	96.6
倒千里光碱-N-氧化物	y=1 950x-14.91	0.999 4	9.0	30.0	101.3
倒千里光碱	y=9 876x-610.4	0.999 5	1.8	6.0	107.1
千里光碱-N-氧化物	y=16 840x-1 102	0.999 2	1.5	5.0	106.3
欧天芥菜碱-N-氧化物	y=74 440x-564.4	0.999 3	0.8	2.7	92.5
千里光宁碱-N-氧化物	y=9 641x-807.0	0.999 6	1.8	6.0	97.9
千里光宁碱	y=19 100x-51.1	0.999 4	1.5	5.0	106.2
天芥菜碱-N-氧化物	y=75 810x-901	0.999 5	0.8	2.7	98.4
千里光菲灵碱-N-氧化物	y=8 207x-605.8	0.999 6	2.5	8.3	102.2
千里光菲灵碱	y=18 720x-972	0.999 7	1.5	5.0	106.5
天芥菜碱	y=122 400x-11 360	0.999 6	0.5	1.7	99.1
促黑激素-N-氧化物	y=35 410x-3 953	0.999 2	1.2	4.0	89.5
千里光碱	y=7 978x-461	0.999 5	2.5	8.3	111.2
欧天芥菜碱	y=104 600x-3 996	0.999 6	0.6	2.0	98.5
促黑激素	y=97 300x-2 394	0.999 3	0.6	2.0	106.9

PAs毒素	回收率/%				相对标准偏差/%
PAs毒素	6 μg·kg^-1	30 μg·kg^-1	60 μg·kg^-1	150 μg·kg^-1	6 μg·kg^-1	30 μg·kg^-1	60 μg·kg^-1	150 μg·kg^-1
克氏千里光碱	90.4	92.4		90.0	2.9	4.8		4.7
倒千里光碱-N-氧化物		90.3	92.1	92.1		4.2	4.4	3.7
倒千里光碱	93.6	94.2		82.6	3.9	5.0		2.5
千里光碱-N-氧化物	92.7	88.0		93.5	3.6	5.0		3.9
欧天芥菜碱-N-氧化物	91.2	90.8		87.6	3.3	4.7		2.9
千里光宁碱-N-氧化物	86.5	86.7		91.3	4.1	3.4		3.5
千里光宁碱	90.7	87.9		85.1	4.6	4.2		2.9
天芥菜碱-N-氧化物	86.8	90.6		90.9	2.7	4.7		3.2
千里光菲灵碱-N-氧化物		89.3	86.8	86.3		4.8	4.0	3.3
千里光菲灵碱	84.8	91.5		92.4	3.3	3.2		3.5
天芥菜碱	89.1	84.6		86.4	4.1	3.9		4.7
促黑激素-N-氧化物	93.7	90.1		91.0	3.4	3.6		3.0
千里光碱		84.5	85.2	86.2		3.8	4.3	4.5
欧天芥菜碱	93.0	90.2		92.5	3.5	3.0		3.1
促黑激素	92.0	84.2		87.3	2.3	3.0		3.0