浙江农业科学 ›› 2023, Vol. 64 ›› Issue (11): 2742-2748.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20230780

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柑橘黄脉病毒一步法RT-PCR快速检测技术探究

刘顺民(), 杜丹超, 蒲占湑, 朱莉, 张利平, 吕佳, 黄振东, 陈国庆(), 鹿连明()   

  1. 浙江省农业科学院 浙江省柑橘研究所,浙江 台州 318020
  • 收稿日期:2023-08-24 出版日期:2023-11-11 发布日期:2023-11-22
  • 通讯作者: 鹿连明(1979—),男,山东安丘人,副研究员,博士,研究方向为柑橘病虫害,E-mail:minglu79@126.com;陈国庆(1964—),男,浙江绍兴人,研究员,本科,研究方向为柑橘植保,E-mail:cgq5373@163.com
  • 作者简介:刘顺民(1992—),男,福建龙海人,硕士,主要从事柑橘植保研究,E-mail: 976089210@qq.com
  • 基金资助:
    台州市科技计划(20ny14);浙江省农业科学院专项经费项目(发展建设类)(2023R27CB001);浙江省科技计划(2023C02057)

  • Received:2023-08-24 Online:2023-11-11 Published:2023-11-22

摘要:

本研究通过对柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的三基因盒基因、病毒外壳蛋白基因及23K基因序列分析并设计出7对引物,对引物特异性和灵敏度进行比较,筛选出能够应用于实验室一步法RT-PCR快速检测CYVCV的引物,由此建立起针对CYVCV一步法RT-PCR快速检测体系。结果表明:引物对TGB1-F/R能从柑橘总RNA稀释160 000倍(0.004 ng·μL-1)的稀释液中检测出CYVCV,利用该体系对607份田间随机样品进行检测,CYVCV的感染率为10.05%,说明该体系可靠稳定,适用于实验室里的大量检测;一步法RT-PCR获得CYVCV的TGB1、TGB2、TGB3、CP和23K的特异性片段,片段序列长度分别为678、327、183、978和669 bp,通过克隆和测序结果比对显示,各片段与已报道的CYVCV病毒序列具有较高的同源性,同源性均在99%以上。

关键词: 柑橘黄脉病毒, 一步法RT-PCR, 快速检测

中图分类号: