紫罗兰基因组DNA快速提取方法的研究

doi:10.16178/j.issn.0528-9017.20221067

浙江农业科学 ›› 2023, Vol. 64 ›› Issue (10): 2454-2457.DOI: 10.16178/j.issn.0528-9017.20221067

紫罗兰基因组DNA快速提取方法的研究

张海梅(), 陈道宗, 谭晨^*()

赣南师范大学生命科学学院,江西赣州 341000

收稿日期:2022-10-24 出版日期:2023-10-11 发布日期:2023-10-24
通讯作者: 谭晨(1988—),男,湖北天门人,讲师,博士,主要从事园林植物遗传育种研究,E-mail:tanchen2020@gnnu.edu.cn。
作者简介:张海梅(1997—),女,云南曲靖人,硕士,主要从事紫罗兰遗传育种,E-mail:zhm1726@163.com。
基金资助:
江西省教育厅科学研究项目(GJJ211433);江西省自然科学基金项目(20212BAB215002)

Received:2022-10-24 Online:2023-10-11 Published:2023-10-24

摘要/Abstract

摘要：

紫罗兰是一种极具观赏和经济价值的植物。基因组DNA的提取是紫罗兰分子育种的基础,但常用的十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)存在操作繁琐、试剂毒性大等缺点,不利于在大规模育种实践中的应用。因此,建立一种简单、快速、安全的紫罗兰基因组DNA提取方法是十分必要的。本研究建立了一种适合紫罗兰基因组DNA快速提取的方法,约30 min即可获得能够用于PCR反应的DNA。该方法提取时间短、操作步骤简单,是一种简单、安全、高通量和低成本DNA提取方法,为紫罗兰分子育种奠定了基础。

关键词: 紫罗兰, DNA, PCR, 快速法

中图分类号:

S681.2

张海梅, 陈道宗, 谭晨. 紫罗兰基因组DNA快速提取方法的研究[J]. 浙江农业科学, 2023, 64(10): 2454-2457.

图/表 6

表1 紫罗兰基因组DNA检测结果

方法	样品	浓度/ (ng·μL^-1)	D₂₆₀/D₂₈₀	D₂₆₀/D₂₃₀
CTAB法	样品1	2 976.5	1.97	2.09
	样品2	4 313.6	1.98	2.18
	样品3	4 003.0	1.98	2.18
高温水煮法	样品1	2 616.6	1.98	2.08
	样品2	2 246.1	1.94	2.05
	样品3	1 084.2	1.96	2.01

图1 CTAB法与高温水煮法提取物琼脂糖凝胶电泳检测结果 M表示marker;1~3表示样品1~3CTAB法提取物;4~6表示样品1~3高温水煮法提取物。

图2 CTAB法与高温水煮法提取DNA的 PCR扩增结果 M表示marker;1~3表示样品1~3 CTAB法提取物;4~6表示样品1~3高温水煮法提取物。

表2 快速法提取紫罗兰基因组DNA原液检测结果

样品	浓度/(ng·μL^-1)	D₂₆₀/D₂₈₀	D₂₆₀/D₂₃₀
样品1	829.3	1.84	0.47
样品2	1 418.7	1.59	0.60
样品3	1 266.0	1.97	0.62

图3 DNA稀释20倍后的PCR扩增结果1 表示CTAB法提取物;2~4表示样品1~3;M表示Marker。

图4 保存3个月后DNA稀释20倍的PCR扩增结果 M表示Marker;1表示CTAB法提取物;2~4表示样品1~3。

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